基因魔剪—CRISPR/Cas9系统（三）

CRISPR/Cas9系统除了在基因敲除等基因编辑方面的应用外，通过对Cas9序列进行突变，失活其催化亚区，并将失去核酸剪切活性的dCas9与一个转录激活亚区融合，表达融合蛋白，在向导RNA（gRNA）的引导下，结合到靶基因的启动子区域，特异性地增强目的基因的转录活性。利用 CRISPR/Cas9系统的序列识别特异性以及操作简便性，科研人员可以容易的进行特定基因的转录激活操作。在本期小优专题中，小优将为您介绍优宁维在CRISPR/Cas9系统基因转录激活应用方面的产品与服务。

1.激活质粒（产品链接）

产品说明：

♦CRISPR/Cas9激活质粒是根据SAM转录激活系统设计的特异性的增强目的基因表达的质粒；

♦CRISPR/dCas9激活质粒包含了以下1:1:1配比的三种质：编码失活的Cas9核酸酶（D10A和N863A）与反式激活结构域VP64融合蛋白的质粒；编码MS2-p65-HSF1融合蛋白的质粒；以及编码靶基因特异性的20 nt向导RNA的质粒；

♦SAM系统提供了强健的转录因子，可以高效率的增加目的基因的转录活性；

♦CRISPR/Cas9激活质粒支持人类与小鼠的基因的转录激活应用，产品分别用名称后面的（h）与（m）标记区分；

♦提供纯化过的质粒，可直接用于转染。

图1. 激活质粒工作原理示意图

Edit-R CRISPRa plasmid co-transfection workflow

产品编号	产品名称	产品规格
GSGH11887	Edit-R Human CRISPRa lentiviral sgRNA	EA
GSGM11893	Edit-R Mouse CRISPRa lentiviral sgRNA	EA
CAS11914	Edit-R CRISPRa Lentiviral hCMV-Blast-dCas9-VPR Plasmid DNA	20 ml
CAS11915	Edit-R CRISPRa Lentiviral mCMV-Blast-dCas9-VPR Plasmid DNA	EA
CAS11916	Edit-R CRISPRa Lentiviral hEF1a-Blast-dCas9-VPR Plasmid DNA	EA
GSGC11913	Edit-R CRISPRa Lentiviral sgRNA Non-targeting Control	EA
GSGH11901	Edit-R CRISPRa Lentiviral sgRNA Positive Controls	20 μg
T-2006-01	质粒专用转染试剂	1ml

其他相关产品：

产品编号	产品名称	产品用途	产品规格
产品链接	相应基因蛋白抗体	对照抗体，蛋白表达检测	EA
产品链接	转染试剂	CRISPR/Cas9质粒转染	EA
sc-108062	Plasmid Transfection Medium	质粒转染用培养基	20 ml
产品链接	Puromycin dihydrochloride	筛选转染成功细胞	EA
产品链接	Hygromycin B	筛选转染成功细胞	EA
产品链接	Blasticidin S HCl solution	筛选转染成功细胞	EA
sc-437275	Control CRISPR Activation Plasmid	阴性对照质粒(非特异性gRNA)	20 μg

2.慢病毒激活系统（产品链接）

产品说明：

♦慢病毒激活系统通过慢病毒侵染向细胞内转到编码了高效特异的过表达目的基因的SAM转录激活系统质粒；

♦SAM复合体位点特异性的结合到转录起始位点上游约200-250 nt的位置，提供强劲的转录因子活性，高效的增强基因转录活性；

♦慢病毒激活系统保存在200 μl含有25 mM HEPES pH7.3的冰冻DMEM培养基中，包含表达靶基因转录上调过程中需要的三个关键原件的质粒：编码失活的Cas9核酸酶（D10A和N863A）与反式激活结构域VP64融合蛋白的质粒；编码MS2-p65-HSF1融合蛋白的质粒；以及编码靶基因特异性的20 nt向导RNA的质粒；

♦适用于难于转染的细胞；

♦慢病毒激活系统支持人类与小鼠基因转录激活应用，产品分别用名字后面的（h）和（m）来标记区分。

图2. 慢病毒激活系统工作原理示意图

Edit-R CRISPRa 试验步骤：

Edit-R CRISPRa参考文献

1.Horlbeck MA, Gilbert LA, et. al., Compact and highly active next-generation libraries for CRISPR-mediated gene repression and activation. 2016 Sep 23;5. pii: e19760. doi: 10.7554/eLife.19760. PubMed 27661255

2.Chavez A, Scheiman J et. al., Highly efficient Cas9-mediated transcriptional programming Nat Methods. 2015 Mar 2. doi: 10.1038/nmeth.3312. 10.1038/nmeth.3312 PubMed 25730490

3.Tanenbaum ME, Gilbert LA, et. al., A protein tagging system for signal amplification in gene expression and fluorescence imaging. Cell. 2014;159(3):635-646. doi:10.1016/j.cell.2014.09.039.

其他相关产品：

产品编号	产品名称	产品用途	产品规格
产品链接	相应基因蛋白抗体	对照抗体，蛋白表达检测	EA
产品链接	Puromycin dihydrochloride	筛选转染成功细胞	EA
产品链接	Hygromycin B	筛选转染成功细胞	EA
产品链接	Blasticidin S HCl solution	筛选转染成功细胞	EA
产品链接	Polybrene	介导逆转录病毒侵染哺乳类细胞	10 mg/ml
sc- 437282	Control Lentiviral Activation Particles	阴性慢病毒对照(非特异性gRNA)	20 μg

以上就是小优为您带来的CRISPR/Cas9系统在转录激活方面应用的产品。

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