蛋白的转印是指，凝胶上分离开来的蛋白质，通过电压电流、真空过滤等作用，转移至膜上，同时维持其相对位置和分辨率的过程。其中，我们常用的电转印技术可分为湿转移、半干转移和干转移，可适用于大部分的蛋白样品。

根据一些实验的特殊需求，可采用除了电转印技术外，如真空过滤法的斑点印迹等技术进行蛋白的转印，以配合蛋白的生化特性和特殊的实验需求。

1.不同的电转印技术

湿转印是一种传统经典的转印技术，是最佳的转印方法。将“滤纸-凝胶-膜-滤纸”完全浸入电转缓冲液中，在恒压下运行将蛋白由凝胶转移至膜上。湿转印过程相对缓慢，于低温下进行。

半干转印是将浸满缓冲液的“滤纸-凝胶-膜-滤纸”置于干燥的阴、阳极板上，在恒流下运行将蛋白由凝胶转移至膜上。半干转印系统缓冲能力较低，不适合长时间转印蛋白，其转印过程更快（15~60 min）。

干转印是将蛋白由凝胶转移至膜上时无需额外加入缓冲液的转印系统，因为阴、阳极板系统中本身含有缓冲液基质。干转印系统的灵敏度低，转移效率低，但转印过程快。

转印过程中电压电流、时间的设置，以厂家的说明为准进行操作，可进行适当的优化。

带负电荷的蛋白向阳极移动至膜上。

2.电转印缓冲液

电转印缓冲液在转印过程中维持电极之间的电连续性，并且提供一个化学环境以维持蛋白的溶解度，又不妨碍蛋白转印至膜上。在选择转印缓冲液时需结合目的蛋白分子量大小、不同转印系统等，进行适当的优化。

标准湿转印缓冲液为含20%甲醇的1XTris-gly缓冲液，可根据蛋白分子量大小适当加入SDS（蛋白分子量>80kDa，推荐加入SDS使之终浓度为0.1%）。
半干转印系统所使用缓冲液，其Tris和甘氨酸比例与湿转印系统不同，主要参考厂家说明进行配比。

甲醇在转印缓冲液中具有两个功能，一是稳定凝胶的尺寸，防止蛋白的分辨率损失；二是从蛋白分子上解离出SDS，提高蛋白分子与膜结合的可能性。降低甲醇在电转缓冲液中含量，对于一些大分子量目的蛋白的转印具有一定的帮助，同时加长转印时间有助于平衡缺少甲醇的缺陷。

根据目的蛋白大小及特性等，选择不同材质（PVDF、NC）和孔径大小（0.45μM、0.2μM）的转印膜，将样品蛋白转印至膜上。主要涉及以下几点的考虑：蛋白结合能力、是否需要醇浸泡、蛋白观察、长期印迹保存、开展多次剥离和再次检测实验的能力。

一般来说，PVDF膜相较于NC膜具有许多优点，如结合能力强、广泛的化学兼容性等。

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