问题一：高背景值或阴性对照值偏高
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可能原因 |
建议 |
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阴性对照孔被阳性对照或样品污染 |
洗涤时，勿将洗液溢出孔外 |
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抗体非特异性结合 |
封闭液不适合，更换封闭液 |
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酶结合物过浓 |
请检查酶结合物是否按说明书规定稀释 |
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洗涤不充分 |
检查洗涤液是否有结晶析出，洗涤液体积是否加入足量 |
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底物在使用前曝光 |
应保存在暗处，避光 |
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读板前停留时间过长 |
加终止液后尽量快速读数 |
问题二：阳性对照值偏低或低吸光度
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可能原因 |
建议 |
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试剂未平衡至室温 |
实验开始前，将试剂盒从冰箱取出平衡至室温 |
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检测体积偏小 |
检查移液器吸液管道是否堵塞 |
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孵育时间过短 |
使用计时器，准确孵育时间 |
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底物受污染 |
使用新配置的试剂，重新实验 |
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样本中有抑制剂 |
叠氮钠会抑制HRP酶的活性 |
问题三：标准曲线差
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可能原因 |
建议 |
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标准品准备不正确
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l 确保使用合适的校正稀释液，按照说明书标明的体； l 在混合或配置溶液时避免生成泡沫； l 确保标准品溶液使用前静置一定的时间； l 确保准确的线性梯度稀释
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孔内洗涤不充分/孔内液体去除不彻底 |
l 勿减少洗涤体积和洗涤次数； l 孔内液体需去除干净，最后一步洗涤时，将板倒置在干净的纸巾上,保证多余水分去除干 l 切勿使孔过干
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不正确的数据整理方法 |
使用说明书推荐的数据处理方法。其他数据处理方法可能会得到不准确的标准曲线回归 |
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底物准备过早 |
在说明书推荐的时间内读板 |
问题四：重复性较差
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可能原因 |
建议 |
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微孔中有气泡 |
用针尖挑破气泡 |
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试剂未混匀 |
确保充分混匀试剂 |
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样本中有杂质或沉淀物 |
使用前离心 |
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微孔包被面被吸头划破 |
加液时小心操作 |
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使用用过的封板胶纸 |
每次须使用新的封板胶封住反应孔 |
问题五：整板阳性信号
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可能原因 |
建议 |
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洗涤液体积不足或底物被残留于孔底的结合物所污染 |
洗涤时，缓冲液充满至孔边缘，但要确保不能溢出孔外 |
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结合物浓度过高 |
检查是否按照说明书推荐比例稀释 |
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底物容器不洁净 |
用酸清洗容器瓶，用蒸馏水冲洗 |
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底物孵育时，微孔板曝光 |
加底物时，立即将板置于暗处 |
问题六：整块板OD值偏低
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可能原因 |
建议 |
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显色时间不足 |
适当延长显色时间 |
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孵育温度偏低 |
选择最适反应温度 |
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未加终止液 |
加入终止液，增强颜色反应的强度，稳定最终的颜色反应 |
