BD Rhapsody质控

一 、单细胞悬液质量评估

细胞数量、细胞活性的精准判断对Single Cell分选标记、建库、下机数据的质量都具有着决定性的作用。如若细胞计数偏高，将会影响建库的成功率;计数偏低，则会显著提高双细胞的比例;而细胞活率过低，就会使测序数据的利用率大打折扣，因此把好单细胞悬液质量这一关尤为重要。

当BD Rhapsody单细胞分选系统对染色后的细胞进行扫描并照相后，根据明场及荧光成像结果，可以对单细胞悬液中的细胞数量、活细胞比例进行计算，进而对单细胞悬液的质量进行评估。

二 、细胞铺板
  当单细胞悬液满足铺板要求后，就可以进行单细胞分选标记操作。在这个步骤中，主要要到BD Rhapsody上样台，BD Cartridge蜂巢板，BD Rhapsody电动移液枪。

在单细胞的铺板过程中，由于不同操作人员手法具有不可避免的差异，不同的液体流速将直接影响单细胞的入孔效果。因此BD Rhapsody分选平台还专门配套了定制的电动移液器，其具有Prime Treat、Cell Load、Bead Load、Wash、Lysis、Retrieval多种操作模式，来对应各种不同的操作。通过已经设定的程序来控制液体的流速，大幅度降低人为操作习惯带来的差异，保证实验操作的一致性。 

根据已有的细胞计数结果，将单细胞悬液稀释到合适的铺板浓度后，就可以进行铺板操作了。待细胞因重力落入蜂巢孔内后，可以通过BD Rhapsody成像系统对细胞的真实入孔情况进行检测，根据图像结果可以清楚看到每个孔内是否有细胞落入以及落入多少个细胞，统计并评估实际的铺板效果。

三、磁珠铺板及清洗
待细胞铺板完成后，就需要往BD Cartridge蜂巢板中加入过量磁珠，来保证大部分孔内都能够落入磁珠，随后再用Buffer清洗去除多余的磁珠。整个过程同样可以通过BD Rhapsody成像系统进行扫描，评估磁珠的实际铺板情况，并统计分析得到细胞和磁珠落入同一孔内的数量，获得细胞的真实捕获情况。

四、细胞裂解&磁珠回收

当蜂巢孔内同时落入细胞和磁珠后，可以在Cartidge板中加入细胞裂解液对细胞进行裂解，使细胞内的RNA和磁珠上的标签进行结合，完成每个细胞内RNA的捕获和标记，再将捕获RNA的磁珠进行回收，待所有质控结果确认通过后，可以进行后续的RNA反转录、cDNA第二链合成等实验操作，而Cartridge板则需要进行一次成像，获得磁珠收集后的扫描图，判断磁珠是否被有效收集。