均相技术在CAR-T细胞治疗全面解决方案

嵌合抗原受体(CAR)T细胞治疗已经改变了免疫肿瘤学领域，为治疗某些血癌提供了一种新的方法，通过基因重编程患者自身的免疫细胞来靶向和摧毁癌细胞。随着下一代嵌合受体的设计和对肿瘤微环境的更好理解，创新的进展，CAR-T治疗也有可能彻底改变治疗实体肿瘤的治疗方法。

我国首个CAR-T细胞疗法产品--复星医药旗下复星凯特阿基仑赛注射液（代号：FKC876）已在2021年6月获国家药监局批准上市。随后2021年9月6日，苏州药明巨诺生物科技有限公司宣布其靶向CD19的CAR-T细胞免疫治疗产品倍诺达瑞基奥仑赛注射液（研发代号：JWCAR029）获批上市，成为全球第六款，也是国内第二款上市的CAR-T细胞疗法。

简单来说， CAR-T疗法是医生先从患者的血液中提取出T-细胞样本，随后对这些T-细胞进行再造，表面上生成名为嵌合抗原受体（CARs）的特殊结构。当这些CAR-T-细胞被重新注射到患者体内时，这些受体帮助T-细胞识别并攻击人体内的癌细胞。

慢病毒转染效率评估P24蛋白检测

慢病毒虽然属于逆转录病毒科的一种，但其结构和基因组的复杂程度远超其他逆转录病毒。这也使得慢病毒具有独特的整合机制和病毒感染持久性。

HIV p24是230个氨基酸磷酸化的衣壳蛋白，形成了HIV病毒的锥形核心，包裹着HIV基因组复合物。在基因治疗中，慢病毒载体通常用于向哺乳动物细胞传递目的基因。抗p24抗原的测定是测量慢病毒转导效率的标准方法。

HIV p24 (high sensitivity) AlphaLISA Detection Kit
AlphaLISA是均相、免洗涤检测技术，高灵敏检测试剂盒设计用于定量测定的血清、缓冲溶液或细胞培养基中的HIVp24。一种生物素化的抗p24抗体与链霉亲和素包被的供体珠结合，另一种抗p24抗体与AlphaLISA受体珠结合。当待测物存在时，供体和受体微珠相互靠近。使用680nm激光激发供体微珠后与环境中氧发生反应，释放单线态氧扩散至受体微珠，从而检测到615nm波长信号。检测Dynamic range: 1.8–30 000 pg/mL。
 
HIV p24 Detection Kit
检测原理是基于HTRF®技术（均匀时间分辨荧光）用于细胞上清中简单快速定量HIVp24，可快速替代ELISA。使用Eu（供体）标记的抗HIVp24抗体和d2（受体）标记的抗HIVp24抗体，待测物存在时，二者相互靠近，用光源激发供体，触发荧光共振能量转移(FRET)，进而在特定波长(665nm)发出荧光。信号强度与HIVp24的浓度成正比。检测Dynamic range: 33–10,000 pg/mL。
 
相关推荐：

货号	产品名称	规格
AL291C	HIV p24 (high sensitivity) AlphaLISA Detection Kit	500 assay
AL332C	HIV p24 AlphaLISA Biotin-Free Detection Kit	500assay
64P24PEG	HIV p24 Detection Kit	500 tests
NEK050001KT	Alliance HIV-1 P24 ANTIGEN ELISA Kit	96 tests

CAR-T增殖活力评估
Luminescence Assays--ATPlite™ 1step
 
萤火虫荧光素酶（Luciferase）在含有镁离子的情况下，可催化荧光素与ATP反应生成荧光素-AMP（中间体）和焦磷酸（PPi）。然后催化中间体氧化生成AMP、CO2和激发态的氧化荧光素。激发态的氧化荧光素在返回基态时发射出光。Luciferase的发光反应不需要额外的激发光，只要Luciferase和底物接触就能产生荧光，发出的光子可以被光敏感元件测到，避免了因背景物质被激发而产生的背景荧光干扰。
活细胞生成的ATP与萤火虫荧光素酶和荧光素反应，促使发光。如果细胞死亡，则ATP生成量减少，发光量也相应减少。通过测量活细胞中的ATP，可评估细胞数量的增减。

ATPlite™1step特点与优势
①高灵敏度、宽动态范围：每孔可检测数个至数万个细胞。 
②无需洗涤：Mix & Measure 匀相检测技术使检测步骤更少。 
③长时间发光：发光信号持续时间长，可进行连续处理或批处理。
 

相关推荐

货号	产品名称	规格
6016731	ATPlite 1step Luminescence Assay System	100ml
6016739	ATPlite 1step Luminescence Assay System	1000ml

肿瘤细胞培养
3D 细胞增殖--ATPlite™ 1step 3D
 
检测依然是根据活细胞生成的ATP与萤火虫荧光素酶和荧光素反应，促使发光。通过测量活细胞中的ATP，评估细胞数量的增减的原理。如果细胞死亡，则ATP生成量减少，发光量也相应减少。
 
相关推荐：

货号	产品名称	规格
6066736	ATP LITE 1-STEP 3D	10ml

3D 培养板 — CellCarrier Spheroid ULA 96
板底为高度生物相容的，超低吸附力聚合物包被。独有的合成聚合物的MPC包被，源于细胞膜的成组分，与极性基团的磷脂（磷脂酰胆碱）具有相同的结构，提供自然生长环境，并消除批间差异。易形成形态大小均匀的球体。无需更换培养基。
 

相关推荐：

货号	产品名称	规格
6055330	CellCarrier Spheroid ULA 96-well Microplates	10
6055802	CellCarrier Spheroid ULA 96-well Microplates	40

CAR-T杀伤能力评估
EuTDA Assays
与 ⁵¹Cr释放法检测原理类似的BATDA法是基于时间分辨荧光测定的非放射性方法，与 ⁵¹Cr释放法不同的是该方法不使用放射性元素标记靶细胞却达到与⁵¹Cr释放法同水平的敏感性。该方法基于用疏水性配体BATDA对靶细胞进行标记。
该乙酰羟甲基酯能迅速跨膜，当其进入细胞内后，经胞内乙酰酯酶将酯键水解形成亲水性配体TDA，TDA不能跨膜从而留在胞内。当靶细胞被杀伤而发生裂解后，胞内TDA随即释放入含有铕(Eu)溶液的上清，并与铕结合形成高荧光且稳定的鳌合物（EuTDA），该螯合物的量与被杀伤的靶细胞数量呈正相关，因此能对免疫细胞的体外杀伤效力进行评价。
 
作为放射性检测的替代方法，更为安全的DELFIA® EuTDA具有众多优势。相较于无法区分非特异死亡的LDH检测，EuTDA法不受效应细胞死亡和裂解的影响，降低背景的同时提升了检测的窗口和稳定性。相较Calcein，BATDA能有效标记脆弱细胞，迅速被细胞摄取和在细胞裂解下完成的释放，提供了稳定的检测窗口和易于标准化等优势。同时，EuTDA细胞毒法不受效应细胞限制，灵活支持利用多种原代免疫细胞和更为稳定的改造细胞系的杀伤功能评估。
杀伤能力

相关推荐：

货号	品名	规格
AD0116	EuTDA CYTOTOXICITY ASSAY KIT CONTAINING	10 plates

基于报告基因的CAR-T功能检测
作为观察基因表达变化的高灵敏度方法沿用至今。将目标 转录调控区域与荧光素酶基因进行融合并导入细胞，然后 对细胞进行刺激/处理，通过检测表达的荧光素酶促成的发 光可测定目标转录调控区域的活性。

 
产品特点与优势：
高灵敏度： 亚飞摩尔到飞摩尔检测水平的高灵敏度。
无需洗涤：Mix & Measure 匀相检测技术使操作更简单且易于实现自动化。
长时间发光：发光信号持续时间长，可进行连续处理或批量处理。
稳定性高：2 - 8 ℃冷藏保存。
不含 DTT：不含类似于 DTT 的硫醇类化合物。
 
相关推荐：

货号	产品名称	规格
6066766	britelite plus	10 mL
6066761	britelite plus	100 mL
6066769	britelite plus	1,000 mL

抗体残留检测
HTRF human IgG Kit 
使用两种不同的特异性抗体以三明治夹心法检测IgG，一种标记为Eu（供体），另一种标记为d2（受体）。当染料接近时，用光源（激光或闪光灯）激发供体，触发荧光共振能量转移(FRET)，进而在特定波长(665nm)发出荧光。试剂检测与样本中存在的抗体结合，从而产生FRET。信号强度与形成的抗体-抗体复合物的数量成正比，因此也与IgG的浓度有关。Dynamic Range 0.9 to 2000 ng/mL。

 
HTRF human Fc Kit 
本试剂盒用于定量测定人fc标记蛋白或人的含量。这种竞争性免疫分析法的原理，如图所示，human IgG（hIgG）或者Fc标记的蛋白可以阻断d2标记的IgG与Eu标记的PAb抗 human Fc之间的结合。特定信号（即能量转移）与样品或标准品human Fc的浓度成反比。Dynamic Range 5.5 to 4000 ng/mL。
 
AlphaLISA human IgG1 Kit
AlphaLISA技术高灵敏度、定量、可重复性模式下检测缓冲液、细胞培养基、血清和血浆中分子。并且    AlphaLISA可以对IgG分型进行检测，IgG1，IgG2，IgG3，IgG4。
在AlphaLISA检测中，一种生物素化的抗分析物抗体与链霉亲和素包被的Alpha供体珠结合，而另一种抗分析物抗体与AlphaLISA受体珠结合。在被分析物存在的情况下，微珠会非常接近。供体珠的激发激发了单线态氧分子的释放，从而在受体珠中触发了一级联的能量转移，从而在615nm处产生一个尖锐的光发射峰。信号强度与IgG1浓度成正比。Sensitivity：(LDL): 47±20 pg/mL。Dynamic range：47-1000000 pg/mL。
 

相关推荐：

货号	产品名称	规格
62HFCPEG	HTRF human Fc Kit	500 tests
6FHIGPEG	HTRF human IgG Kit	500 tests
6FMIGPEG	HTRF Mouse Fc Kit	500 tests
AL205C	IgG (human) AlphaLISA Detection Kit	500 Assay
AL529C	IgG (mouse) AlphaLISA Detection Kit	500 Assay
AL3129C	IgG Fc (human) AlphaLISA Detection Kit	500 Assay
AL307C	IgG1 (human) isotyping AlphaLISA Detection Kit	500 Assay
AL310C	IgG4 (human) isotyping AlphaLISA Detection Kit	500 Assay

以上仅为部分产品货号，更多产品咨询请联系优宁维。尚有TCR通路的全线解决方案，请听下回分解哦~
HTRF®和AlphaLISA®需要使用搭载有相应模块的酶标仪进行读值，优宁维推荐PerkinElmer VICTOR Nivo™多功能酶标仪：