抗体纯化

1、Protein A 和 Protein G填料有什么区别？
答：ProteinA载量更高，洗脱条件相对温和；Protein G Sepharose 可以广泛、更强地结合更多类型的IgG。

2、抗体片段的纯化填料，如何选择？
答：不同配基结合特征如下 ：
•     rProtein A 和 PrismA 配基可以结合抗体 Fc 区域以及重链可变区VH3。
•     Protein G 配基除了与 IgG 的 Fc 区域特异性结合，还可以和某些抗体的 Fab 段结合。
•     Capto L 配基对于人 kappa 亚单位可变区 I, II 和 IV 亚型以及大鼠的 K1 轻链有很强的亲合力，结合位点在 Kappa 轻链的可变区。与不同种属和亚型的亲和力差异，请查询附件。
•     KappaSelect 层析介质与 KappaFab ( 恒定区 ) 结合，以及LambdaFabSelect 层析介质与 LambdaFab( 恒定区 ) 结合。

3、小鼠腹水中抗体样品纯化，如何进行预处理，避免堵柱子？
答：腹水中经常含有高浓度的脂蛋白，这些脂蛋白和脂类物质会堵塞层析柱，最好能在纯化之前去除。方法一是在二价离子存在的情况下，硫酸右旋葡糖酐能够沉淀脂蛋白，沉淀可以通过离心除去 ；方法二 PVP 能产生一个 pH 值依赖的沉淀效应， PVP 在 pH＝ 7.0 时能够沉淀 b- 脂蛋白和球蛋白。另外也可以使用硫酸铵沉淀法。

4、Protein A Sepharose和 Protein G Sepharose可以用来做Co-IP嘛？
答：可以。Cytiva也提供ProteinA或者ProteinG的磁珠产品。

5、如何进行人血清中 IgE 样品纯化？
答：(1)可以尝试 Capto L，注意去除血清中同样会结合 Capto L 且含量更大的 IgG 污染。
(2)通过制备抗 IgE 抗体用于纯化。
(3)也可以考虑通过离子交换或者疏水层析等手段进行纯化。
注 ：去除血清中的白蛋白、 IgG 污染，可以选择 Albumin & IgG Depletion 产品，含 Protein G 片段及 HSA 结合蛋白配基。

6、IgM 有对应的纯化方案吗？
答：IgM 有对应的特异性亲和纯化预装柱 HiTrap IgM Purification 5×1ml。另外， IgM 五聚体比较大，人的 IgM 约 900KD，可以考虑用 Capto Core 700 进行纯化。