HUVEC细胞培养攻略
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人脐静脉内皮细胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cells,HUVEC)是脐静脉的重要构成细胞之一。当进行血管内皮细胞实验时,通常使用人脐静脉内皮细胞,而非静脉内皮细胞或动脉内皮细胞。永生化的HUVEC会通过慢病毒转染的方式携带RFP基因或GFP基因。
HUVEC细胞基本信息
HUVEC细胞基本信息 | |
名称 | HUVEC(人脐静脉内皮细胞) |
形态 | 上皮样 |
生长特性 | 贴壁 |
接种密度 | 8.0 x 103-3.0 x 104 viable cells/cm2 |
传代比率 | 1:2-1:3 |
图1 HUVEC(人脐静脉内皮细胞)
首先要讨论的是HUVEC的“嘴巴刁不刁”?通常来说,HUVEC的“胃口”还是蛮“刁”的,营养需求很高,除了营养种类丰富的F12和必不可少的胎牛血清(如表2所示),肝素和血管内皮生长因子也是必须的。如图2所示,长势良好的HUVEC呈鹅卵石样,轮廓清晰,铺展均匀,一般2-3天可传代。
下表为HUVEC精心准备的“食谱”
营养 | 含量 |
F12(abs9563) | 0.9 |
胎牛血清(abs981) | 0.1 |
肝素(abs47014863) | 终浓度0.1mg/ml |
ECGS血管内皮生长因子( abs04176) | 0.03-0.05mg/ml |
双抗(abs9244) | 0.01 |
图2 长势良好的HUVEC(人脐静脉内皮细胞)
其次要讨论一下为啥头天换液,第二天HUVEC无限细胞系突然出现空泡化?如图3所示,严重空空泡化的HUVEC。这里要注意的是有限细胞系的空泡化往往是细胞凋亡的显著特征,与细胞本身状态有关。而无限细胞系空泡化通常与外界因素有管,有以下两种可能: 第一点是培养液的pH值与细胞正常所需pH值差别太大,导致细胞代谢异常,出现空泡化;第二点是在细胞培养过程中,由于血清浓度不够、药物作用、外界刺激等情况下导致细胞代谢出现问题,内质网应激状况下会出现细胞空泡化的情况。
图3 空泡化的HUVEC(人脐静脉内皮细胞)
解决细胞空泡化,通常有两种方法:1. 测定完培的pH,看其酸碱性是否适宜。多数细胞适宜的pH范围为7.2-7.4。2. 若培基或血清是开封存放很久的,可换用新鲜的完配给细胞换液;若都是新开封的,可换用新批次的基培或血配制培养液,给细胞换液观察。
最后要讨论的是如何解决HUVEC聚团问题?培养瓶尤其是培养板的亲水性较差时或血清中的促贴壁因子不足时,会导致HUVEC细胞聚团问题。解决办法:培养瓶前一天用明胶(abs47051214)包被可有效预防HUVEC聚团。包被方法:以 T25 培养瓶为例,取5ml的明胶,加入培养瓶, 放置37℃条件下至少30分钟,然后用枪头将液体吸出即可。如图示4所示,是铺展均匀的HUVEC(人脐静脉内皮细胞)。
图4所示,正常贴壁,伸展均匀的HUVEC(人脐静脉内皮细胞)
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abs9483 | 高糖DMEM培养基 | 500ml |
abs9484 | RPMI-1640培养基 | 500ml |
abs9505 | MEM培养基 | 500ml |
abs9506 | α-MEM培养基 | 500ml |
abs9554 | Ham's F-12 | 500ml |
abs9561 | DMEM/F-12培养基 | 500ml |
abs961 | 10×PBS缓冲液 | 500ml/500ml×10 |
abs962 | PBS缓冲液 | 500ml |
abs970 | D-PBS缓冲液(1×,无钙镁) | 500ml |
abs971 | D-PBS缓冲液(含 Ca2+ Mg2+) | 500ml |
abs9257 | Hanks平衡盐溶液(不含Ca2+ Mg2+,无酚红) | 500ml |
abs9258 | Hanks平衡盐溶液(含Ca2+ Mg2+,无酚红) | 500ml |
abs47014938 | 胰蛋白酶-EDTA消化液(0.25%) ,含酚红 | 100ml |
abs47047375 | 胰蛋白酶-EDTA消化液(0.25%),不含酚红 | 100mL |
abs9479 | 无DMSO无血清细胞冻存液 | 100mL |
abs9417 | 无血清细胞冻存液 | 100mL |
abs9473 | 细胞冻存液(含血清) | 100mL |
关键词:HUVEC、脐静脉内皮细胞、空泡化、衰老、聚团
注:图源网络和客户,仅供参考学习用
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