【罗工流式秘籍72】人和小鼠的NK细胞研究指标怎么选？

NK细胞

NK细胞是淋巴细胞中的一员，它无需抗原预先致敏就能破坏靶细胞，且无MHC限制性，应答速度快，在免疫应答的早期即可发挥作用。在一些疾病中NK是免疫细胞的主力军，如肿瘤免疫，感染免疫等。

针对NK细胞的研究，指标该如何选择在于我们的研究目的。本文将介绍一些经典的NK指标，给大家作参考。

一、常用NK鉴定指标

Human：CD3-CD56+CD16 +/-

人的NK细胞在发育的过程中表达出特异性的指标CD56，也有部分NK细胞表达FcγRIIIA（CD16），发育终末还会表达CD57。外周血或其他非纯化NK细胞的样本，检测时还要加上CD3同时检测，以排除一类特殊T细胞——NKT(CD3+CD56+)。

人NK细胞常会分成CD56++ CD16 +/-和CD56dim CD16 ++两个亚群；两者在不同组织器官中占比和功能差异明显。

CD3-CD56dimCD16bri：高细胞毒活性的NK亚群

CD3-CD56briCD16dim：分泌细胞因子的NK亚群

Mouse:CD3e-CD49b+NK1.1+NKP46+

常规NK检测一般阳性指标CD49b+NK1.1+NKP46+，3者选1就可以判断NK细胞群比例，其中NK1.1在NK细胞发育的最初始阶段就开始表达，相对会检测的更全面一些。

但NK1.1和CD49b选择要根据小鼠的品系：

NK1.1：表达在C57BL, FVB/N, NZB, 但在AKR, BALB/c, CBA/J, C3H, C57BR, C58, DBA/1, DBA/2, NOD, SJL, 129中不表达。

CD49b：由于还会表达在胸腺上皮细胞、B细胞、单核细胞等中，在用于NK鉴定时，更推荐抗原克隆位点为DX5的抗体，特异性会更强，基本所有小鼠品系都表达，但在NOD中不表达。

小鼠NK细胞也可以按发育和功能差异分亚群：

CD11blowCD27low→CD11blowCD27high→CD11brighCD27high→CD11brighCD27low

其中

CD11blowCD27high：未成熟的NK亚群

CD11brighCD27low：高细胞毒活性的NK亚群

CD11brighCD27high：分泌细胞因子的NK亚群

二、常用NK功能检测指标

活化水平：CD107a

自然杀伤：脱颗粒途径(Granzyme B, Perforin)。

凋亡诱导配体途径：Fas/FasL、TRAIL/DR4 DR5和TNF/TNFR。

合成和分泌细胞因子：IFN-g，GM-CSF等，活化Mf,诱导Th0®Th1,Ig类别转换;IL-10,TGFβ等导致免疫耐受。

NK细胞表面受体：激活或抑制性受体的表达变化调节NK的免疫功能

文末总结：