【罗工流式秘籍73】小鼠ILC细胞亚群检测指标怎么选？

天然淋巴细胞( Innate lymphoid cells，ILC)，是淋巴细胞家族中的一员，是一群在淋巴结发育、 组织损伤修复、宿主抗感染等过程中发挥重要作用的天然免疫细胞。ILC与Ｔ细胞的表型和功能相似，也类似T细胞，有非常多的亚群，可以根据其表达的转录因子和细胞因子等进行分类，发挥各自不同的调节作用，其亚群的比例或功能失调与过敏性疾病、慢性感染、代谢性疾病、肿瘤等多种疾病密切相关。

 

ILC细胞，主要分为ILC祖细胞（ILCP）、成熟自然杀伤（NK）细胞、ILC1细胞、ILC2细胞、NCR+ ILC3细胞、NCR-ILC3细胞、CCR6+（LTi，淋巴组织诱导）样ILC3细胞、调节性ILC（ILCreg）细胞。

 

 

圈门策略可参考下图：

①门控圈法：

 

 

②圈CD127+lin-的总ILC细胞，并从中首先圈出PLZF+CD218A+的ILCP，其中Lin为阴性指标的合集。

Lin推荐至少包含：B220/CD19排出B细胞干扰；CD3排除 T细胞亚群干扰；CD11b，CD11c排出髓系，NK，DC等细胞干扰；F4/80排出巨噬细胞干扰；Gr-1排除髓系、MDSC等细胞。

其他更完善的添加指标：FcεR1α排出肥大细胞和嗜碱性粒细胞，TCRγδ排除γδT细胞，TER-119 排除红细胞。

 

 

③从ILCP-的群体中再详细圈ILC的各种亚群

各组织都可以采用相同的检测指标，只是不同组织力的亚群占比差异会比较显著（下图上为肺组织，下行为肠道组织）

 

④可跟Th细胞的因子检测一样结合PMA/Ionomycin/BFA的细胞因子刺激分泌和阻断外排的混合剂，体外短时刺激5 h左右，或再加其他的一些诱导因子做体外刺激，来检测每种亚群对应的细胞因子的分泌情况

 

 

⑤NK细胞也属于ILC群体中的一员，但由于其会表达多种lin指标中包含的marker，因此圈门跟常规ILC不同，要从Lin+中进行圈门

 

⑥ILCreg 主要依靠IL-10来分辨：再死活-CD45+lin-后，靠CD127+IL-10+来进行圈定

 

 

以上，属于ILC非常详细的一个ILC亚群的圈门方法，如果不要求这么细致的话，通常可以进行指标的简化，每种亚群选择1-2个代表性的标志物即可，以下2种文献中的简化圈门方法，当然不止这两种组合方式：

 

 

 

参考文献：

[1] Spits H, Artis D, Colonna M, et al. Innate lymphoid cells—a proposal for uniform nomenclature[J]. Nature reviews immunology, 2013, 13(2): 145-149.

[2] Mincham Kyle T,Snelgrove Robert J,OMIP-086: Full spectrum flow cytometry for high-dimensional immunophenotyping of mouse innate lymphoid cells.[J] .Cytometry A, 2022, 1-7.

[3] Wang S, Xia P, Chen Y, et al. Regulatory innate lymphoid cells control innate intestinal inflammation[J]. Cell, 2017, 171(1): 201-216. e18.

[4] Amarnath S . Innate Lymphoid Cells Methods and Protocols: Methods and Protocols[J]. Methods in Molecular Biology, 2020.