Lifespan Bioscience是世界免疫组织化学和抗体验证的领导者，在83个国家提供超过700,000种产品，其中IHC-plus™产品线的组化抗体已被广泛验证可用于福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)的人体组织的免疫组织化学(IHC)。优宁维携手Lifespan为大家带来本年度的首次促销，凡购买清单内的抗体产品，即可享受促销价格，活动时间：即日起-12月14日，更多详情请前往优宁维在线商城查看。
使用Lifespan的IHC-plus™产品线对人组织的常见癌症研究靶点进行免疫组化染色结果图。
使用Lifespan的IHC-plus™产品线对人组织的常见神经研究靶点进行免疫组化染色结果图。
部分相关组化抗体推荐：
| Product Number | Product Name |
| LS-A3250 | GPR75 Rabbit anti-Human Polyclonal (N-Terminus) Antibody |
| LS-A360 | CCR8 / CD198 Rabbit anti-Human Polyclonal (Cytoplasmic Domain) Antibody |
| LS-A1589 | GPR75 Rabbit anti-Human Polyclonal (C-Terminus) Antibody |
| LS-A8025 | FAP Alpha Rabbit anti-Human Polyclonal (Extracellular Domain) Antibody |
| LS-A8809 | CD27L / CD70 Rabbit anti-Human Polyclonal (Internal) Antibody |
| LS-A1052 | Rhodopsin / RHO Rabbit anti-Human Polyclonal (Extracellular Domain) Antibody |
| LS-A4004 | FSH Receptor / FSHR Rabbit anti-Human Polyclonal (N-Terminus) Antibody |
| LS-A3847 | CCR8 / CD198 Rabbit anti-Human Polyclonal (C-Terminus) Antibody |
| LS-A830 | GRPR Rabbit anti-Human Polyclonal (Extracellular Domain) Antibody |
选择了合适的抗体之后，在免疫组化实验的时候还是有不少小伙伴会在切片选择、抗原修复、封闭等问题上有困惑，下面小优就针对几个常见的实验问题为大家答疑解惑：
Q：石蜡切片和冰冻切片有什么区别，我们要怎么选择哪种切片形式？
A：石蜡切片和冰冻切片，做为组织切片界的两大常用方法，各有所长，选择切片方法和抗体时要注意哦
| 石蜡切片(IHC-P) | 冷冻切片(IHC-F) | |
| 包埋剂 | 石蜡 | 冷冻包埋剂(O.C.T.) |
| 固定 | 先固定后切片 | 切片前或切片后固定 |
| 储存条件 | 石蜡包埋组织块室温储存多年 | 冷冻组织-80℃ 一年 |
| 切片厚度 | 4-6um | 6-8um |
| 切片条件 | 常温切片机 | 冷冻切片机 |
| 组织脱水 | 必需 | 不必需 |
| 切片水化 | 必需 | 不必需 |
| 抗原修复 | 必需 | 不必需 |
| 洗涤液 | TBST | PBS 或 TBS |
| 封闭液 | 含Tween® 20的TBST缓冲液稀释NGS | 含0.3%TritonTM X-100的1XTBS稀释NGS |
| 优点 | 1. 有利于保存组织形态 |
1. 抗原保存较好，冰冻切片能够较好地保存细胞和组织中的酶、脂质及DNA等活性物质。 2. 操作步骤简单，适用于需要快速结果（如即刻诊断）的场合。 |
| 2. 石蜡切片可以在室温下长期保存而不会退化。 | ||
| 3. 可得到较薄的切片：石蜡切片可以切得更薄，便于显微镜下观察 | ||
| 缺点 | 1. 制备时间长 2. 需要抗原修复，因为高温、酒精脱水等因素导致一些敏感抗原的损失或降解 |
1. 形态保留较差，由于快速冷冻，可能会破坏细胞和组织结构形态 |
| 2. 储存要求高 | ||
| 3. 切片比石蜡切片更厚 |
Q：在什么情况下需要进行组织抗原修复，抗原修复的条件是什么？
A:由于组织中部分抗原在甲醛或多聚甲醛固定过程中，发生了蛋白之间交联及醛基的封闭作用，从而失去抗原性，这种情况下需要进行抗原的修复。通过抗原修复，可以使得细胞内抗原决定族重新暴露，提高抗原检测率。
小优也在此为大家提供一些抗原修复的要点：
1. 方法选择：修复方法从强到弱一般分为三种，高压修复、微波修复、胰酶修复。对于热诱导的抗原修复，通常使用微波或者压力锅进行加热，还可以使用蒸汽进行。另外，有些抗原可能需要采用酶诱导的修复方法，如胰蛋白酶或者果胶酶。
2. 修复液选择：通常情况下，采用柠檬酸缓冲液，EDTA缓冲液或者Tris缓冲液。每种抗体可能需要一个特定的抗原修复液，需要查阅相关手册或文章。
3. 时间和温度：时间过长或者温度过高可能会过度暴露抗原，影响到结果的特异性；时间过短或者温度过低可能不能完全暴露抗原，影响到结果的灵敏度。
4. 冷却时间：热诱导抗原修复后需要在室温下冷却至少20分钟，使得组织切片与抗原修复液分离，防止非特异性结合。
Q：免疫组化实验过程中有样本封闭的步骤，封闭血清的选择原则是什么？
1. 膜上或切片上有剩余的位点可以非特异性吸附抗体，造成后续结果的假阳性
2. 封闭血清一般是和二抗同一来源的，血清中动物自身的抗体，预先能和组织中有交叉反应的位点发生结合，否则在后面的步骤中如果和二抗发生结合，会造成背景
3. 也可以用小牛血清、BSA、羊血清等，切记不能与一抗来源一致哦。
Q:我的实验中会使用小鼠单克隆抗体对小鼠组织进行染色（Mouse-on-mouse，MOM），会有产生背景染色，有什么办法能去除这种背景染色吗？
使用小鼠抗体染色小鼠组织时，经常观察到高水平的背景着色，主要原因有两个：
1. 二抗非特异性识别染色组织中内源性小鼠 IgG；
2. 二抗非特异性识别样本中 B 细胞、浆细胞和巨噬细胞上的 Fc 受体。
常见的消除MOM染色背景的方法有如下两种：
1. 使用专门的商品化Mouse-on-mouse染色试剂盒
2. 在使用与二抗相同种属的血清封闭之后，再使用Fab的片段二抗来和一抗进行孵育，可以有效的减少高背景现象。大家可以参考这篇更详细的指南：IHC实验中一抗与样本种属来源相同，该如何解决？
部分相关MOM产品推荐：
| 货号 | 产品名 | 规格 |
| ADI-950-114-0100 | POLYVIEW® (mouse on mouse-HRP) IHC kit | 100 tests |
| 115-007-003 | AffiniPure Fab Fragment Goat Anti-Mouse IgG (H+L) | 1mg |
| 315-007-003 | AffiniPure Fab Fragment Rabbit Anti-Mouse IgG (H+L) | 1mg |
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