基于微珠的多重Luminex® xMAP® 检测技术

根据Luminex^®（DiaSorin的一家公司）的说法，xMAP^®是世界上使用最多的多重分析技术，这一说法得到了70,000多篇同行评议论文的支持。其中包括对使用Jackson公司二抗的多次引用，这些二抗是使用该平台进行许多诊断分析的基本检测试剂。

1、Luminex^®检测的原理

xMAP^®技术基于使用彩色编码珠，这些珠子用不同比例的两种荧光基团（一种红色，一种红外线）染色，以提供独特的光谱特征。在典型的检测设置中，每组不同光谱的微珠都涂有不同的分析物特异性抗体，并在与样品孵育前进行初步阻断。洗涤去除未结合的物质后，加入生物素化的分析物特异性抗体形成夹心复合物，然后再加入链霉亲和素-藻红蛋白（PE）共轭物完成组装。接下来，在基于流式细胞仪的Luminex^®仪器上读取珠子，用红色（630 nm）激光识别每组珠子，用绿色激光（532 nm）确定 PE 衍生信号的大小，该信号与结合的分析物的量成正比。该装置如图 1 所示。

图1：典型的Luminex^®(xMAP^®)分析设置

另一种方法是在每组微珠上涂上蛋白质分析物，以捕获血清、唾液和脑脊液等样品类型中的抗体。在这种装置中，通常使用PE结合的抗物种抗体（图2a）或生物素标记的抗物种抗体与PE结合来完成检测，Jackson公司的二体被广泛用于这些类型的检测。

图2：使用分析物结合的珠子从患者样本中捕获抗体，然后使用以下方法进行检测的Luminex替代装置：A. PE 结合的抗样本物种抗体。B. 先用生物素化的抗物种抗体，再用 PE 结合的链霉亲和素产生信号放大。

2、xMAP^®技术的优势

与其他多重免疫测定一样，xMAP^®技术节省了样品材料、试剂和时间，并消除了不同的缓冲系统、环境条件和操作员等干扰变量，从而更准确地比较同一检测中的不同分析物。然而，xMAP®技术的一个突出特点是，它可以同时检测每个样本多达500种分析物，超过了大多数多重免疫分析法。此外，现在可以使用xMAP INTELLIFLEX^®技术测量每个分析物的两个参数。Luminex科学应用高级市场经理Dominic Andrada解释说：“xMAP INTELLIFLEX®通过加入第二个（405 nm）检测通道，增强了原有xMAP技术的功能。这使研究人员能够有效地将每个样本获得的读数增加一倍。例如，使用 xMAP INTELLIFLEX^®，可以在同一种微珠上检测感兴趣的蛋白质和特定的翻译后修饰。xMAP^® 技术的另一个重要优势，是与受到固相动力学限制的ELISA和微阵列相比，小尺寸、低密度的微珠可缩短检测时间¹。

3、xMAP^®技术的应用

由于xMAP^®技术具有高度灵活性，因此它几乎可用于所有的研究应用。这些应用包括研究癌症（例如，通过测量免疫检查点蛋白、循环肿瘤标志物或转移标志物）、炎症（例如，通过量化细胞因子、趋化因子或自身抗体）和细胞信号通路（例如，通过监测 Akt/mTOR、NFκB 或 STAT 信号分子）。XMAP^®技术还可用于研究新陈代谢、衰老和病毒学的潜在机制，以及研究神经退行性变异、代谢紊乱和心血管疾病。

4、Jackson ImmunoResearch 用于 xMAP^® 检测的高品质试剂

Jackson ImmunoResearch 专注于生产生命科学应用领域的二抗，公司的产品被广泛引用于 xMAP^® 技术。

例如：

1）在《2021年科学报告》发表文章，使用Jackson的生物素化驴抗人 IgG Fc 特异性抗体检测了报道的吞食密歇根湖水的人唾液中三种诺罗病毒和隐孢子虫的 IgG 抗体；

2）2023免疫学文章引用了Jackson的PE标记的羊抗人抗体，用于检测血清中抗SARS-CoV-2抗体^2-3；

3）R-Phycoerythrin AffiniPure F(ab′)₂ 片段山羊抗小鼠 IgM、µ 链特异性和 R-Phycoerythrin AffiniPure F(ab′)₂ 片段山羊抗小鼠 IgG、 Fcγ 片段特异性抗体是 SLAS 文章中的特色抗体，该研究报告了用于检测血浆、腹水和脑脊液中抗糖蛋白抗体的 xMAP^® 检测方法的开发情况⁴。糖基化的变化与先天性疾病、自身免疫性疾病和癌症有关，人们认为从不同的人体体液中生成抗糖基化抗体图谱可能有助于预测疾病的结果或病人对治疗的反应。

参考文献：

【1】Khalifian, S., Raimondi, G., & Brandacher, G. (2015). The use of luminex assays to measure cytokines. The Journal of investigative dermatology, 135(4), 1–5. https://doi.org/10.1038/jid.2015.36/

【2】Egorov, A. I., Converse, R., Griffin, S. M., Bonasso, R., Wickersham, L., Klein, E., Kobylanski, J., Ritter, R., Styles, J. N., Ward, H., Sams, E., Hudgens, E., Dufour, A., & Wade, T. J. (2021). Recreational water exposure and waterborne infections in a prospective salivary antibody study at a Lake Michigan beach. Scientific reports, 11(1), 20540. https://doi.org/10.1038/s41598-021-00059-2/

【3】Lundin, S. B., Kann, H., Fulurija, A., Andersson, B., Nakka, S. S., Andersson, L. M., Gisslén, M., & Harandi, A. M. (2023). A novel precision-serology assay for SARS-CoV-2 infection based on linear B-cell epitopes of Spike protein. Frontiers in immunology, 14, 1166924. https://doi.org/10.3389/fimmu.2023.1166924/

【4】Antonia Katharina Hefermehl, Sanne Maria Mathias Hensen, Carina Versantvoort, Andrée Rothermel, Uğur Şahin, Automated glycan-bead coupling for high throughput, highly reproducible anti-glycan antibody analysis, SLAS Technology,2023,,ISSN 2472-6303, https://doi.org/10.1016/j.slast.2023.08.003.5

货号	种属来源/对应一抗种属	特异性	偶联标记	规格
016-000-114	/	/	Streptavidin	10 mg
016-030-084	/	/	Peroxidase-conjugated Streptavidin	1 mg
109-605-098	山羊/人	Fcγ Fragment	Alexa Fluor ^® 647	1 mg
109-006-129	山羊/人	Fc5µ Fragment	Unconjugated	1 mg
109-066-006	山羊/人	F(ab‘)² Fragment	Biotin	0.5 ml
115-006-075	山羊/小鼠	µ Chain	Unconjugated	1 mg
115-006-071	山羊/小鼠	Fcγ Fragment	Unconjugated	1 mg