蛋白质产品的内毒素去除策略

蛋白质产品的质量和安全性是至关重要的。其中，内毒素的去除是确保产品质量的关键环节。本文将分享一些内毒素去除的方法，包括离子交换、凝胶过滤、超滤和亲和层析，帮助您更好地选择内毒素去除的方法。

 

内毒素简介
内毒素是某些细菌细胞壁的组成部分，其在蛋白质产品中可能存在，并可能引发不良免疫反应。内毒素的特点是耐热、化学性质稳定，不易通过常规的灭菌方法予以去除。因此，需要在生产过程中采取专门的方法来去除内毒素。

 

内毒素去除方法
我们来介绍一些基本的内毒素去除方法，如EtoxiClear给内毒素去除提供新的解决方案离子交换、凝胶过滤、亲和层析等。这些方法在蛋白质纯化过程中非常常见，它们可以有效地去除大部分的内毒素。
当然，不同的内毒素去除方法有其各自的优缺点，我们需要根据具体情况和产品要求选择最合适的方法。同时，我们也需要注意内毒素去除的效率和成本，以确保产品的质量和竞争力。

下表分享一些常见的蛋白质内毒素去除方法，希望能够为大家提供一些有用的参考：

 

纯化方式	优势	缺点	特点
离子交换	1. 可有效去除内毒素 2. 操作简便，适应性强	1. 对不同蛋白质的分辨率有限 2. 可能影响蛋白质的生物活性	基于离子交换原理，适用于大规模生产
凝胶过滤	1. 可根据分子大小进行分离 2. 有助于蛋白质产品的纯化	1. 对内毒素的去除效果有限  2. 凝胶成本较高	基于分子大小差异进行分离，常用于蛋白质的纯化过程
超滤	1. 处理效率高，可实现连续生产 2. 不引入新的杂质	1. 对内毒素的去除效果有限  2. 对膜的依赖较高	基于膜过滤技术，适用于大规模生产
亲和层析	1. 高纯度分离，高度特异性的蛋白质分离 2. 对内毒素的去除效果好	1. 成本较高	基于生物分子之间的特异相互作用进行分离，适用于对纯度要求高的产品

 

EtoxiClear™亲和层析

亲和层析是一种特殊的蛋白质纯化方法，其利用生物分子之间的特异相互作用进行分离。亲和层析具有高选择性和高分辨率，可以更好的去除内毒素。亲和层析的优点在于其高度特异性和高纯度，适用于对纯度要求很高的蛋白质产品的生产。

EtoxiClear™是一种高性能、非离子交换、合成的亲和层析填料，可经济高效地去除内毒素。EtoxiClear™产品有凝胶填料和一次性预装柱两种形式，满足不同的工艺要求。
 

 

EtoxiClear™系列产品主要特点：
特异性高：专为去除内毒素而设计，可特异性去除内毒素
高载量：高内毒素动态结合载量 (> 1,000,000 EU/ml)
pH 兼容性广：pH 4.0 - pH 8.0
填料耐碱性强： 0.5M-1M NaOH CIP
低蛋白结合率：通常为>90%回收率
高度稳定、人工合成、无毒的亲和配基
有预装柱和填料两种产品形式，可满足不同需求
满足GMP物料要求，法规注册资料完善
经济高效，支持量产

 

产品优势：

可扩展性
EtoxiClear™已被证明能够在实验室规模(5mL柱)和工业规模(785mL)下有效去除纯化的免疫球蛋白溶液中的内毒素；
 

上样：含有相似起始内毒素浓度的IgG蛋白溶液(~5 mg/mL)
 

处理能力强
EtoxiClear™可只提供凝胶填料或一次性预装柱，以满足不同的实验需求。下表可用于估算处理物料所需的柱尺寸。
 

规格：EvolveD™柱，5 min 保留时间
 

针对常用缓冲液的内毒素清除数据
EtoxiClear™可用于各种缓冲液的内毒素去除。下表显示了细胞培养应用中常用的各种缓冲液的内毒素清除效率，即使较低的起始内毒素浓度(~20EU/mL)也可以有较高的内毒素清除率。
 

* 等于或低于检测限值
 

高内毒素清除率
EtoxiClear™具有很高的内毒素清除率，可从多种蛋白质中进行出色的蛋白质回收，如下表所示的人血清白蛋白和免疫球蛋白溶液(均为~9 mg/mL)。

 

内毒素清除率：99.7%

 内毒素清除率：98.9%

低蛋白结合率
与离子交换吸附剂不同，EtoxiClear™显示出极低的蛋白质结合性，不受蛋白质等电点范围限制，蛋白质回收率高(通常高于90%)，如下所示：

 

 

总结：

蛋白质产品的内毒素去除是生产过程中的重要环节。通过离子交换、凝胶过滤、超滤和亲和层析等方法，可以有效去除内毒素，提高蛋白质产品的质量和安全性。在实际生产过程中根据具体的产品和工艺要求选择合适的方法或结合使用多种方法能够更好地保证产品质量和安全性。

英国Astrea Bioseparations于1987年成立，公司前身是Affinity Chromoatography Ltd，其从英国剑桥大学独立出来专注于吸附填料的研发和生产。Astrea Bioseparations 公司两大核心专利技术（产品）Mimetic ligand® 和PuraBead® 是公司产品的基石，迄今为止已有22个上市产品（FDA/EMA） 使用 Astrea Bioseparations公司的产品用于商业化生产，其中不乏跨国公司和新兴生物技术公司。

 

产品信息：

货号	品名	规格	品牌
3250-00010	EtoxiClear (10 mL)	10mL	Astrea
3250-00025	EtoxiClear (25 mL)	25mL	Astrea
3250-00100	EtoxiClear (100 mL)	100mL	Astrea
3250-00500	EtoxiClear (500 mL)	500mL	Astrea
3250-01000	EtoxiClear (1 L)	1L	Astrea
6646	EtoxiClear™ 4 x 1 mL	4x1mL	Astrea
6647	EtoxiClear™ 4 x 5 mL	4x5mL	Astrea
6746	EtoxiClear® Column, 1 x 1 mL	1 x 1 mL	Astrea
6747	EtoxiClear® Column, 1 x 5 mL	1 x 5 mL	Astrea
4251-00005	EtoxiClear 5 mL Column	5mL	Astrea
4251-00050	EtoxiClear 50 mL Column	50mL	Astrea
AS025100-PC3250-G	EtoxiClear 50 mL EvolveS	50mL	Astrea
4520-PC3250	EtoxiClear™, 200 µL	200µL	Astrea