HRP酶标二抗和荧光二抗有什么区别？分别在什么时候用？

在生物学实验中，二抗的选择至关重要。其中，HRP酶标二抗和荧光二抗是两种常见的二抗类型，它们各具特色，并在不同的实验场景下发挥着关键作用。

 

一、HRP酶标二抗

1. 定义及特性

HRP酶标二抗，即辣根过氧化物酶（Horseradish Peroxidase, HRP）标记的二抗，是生物学实验常规用的二抗。其特点包括比活性高、稳定性好、分子量小、纯酶容易制备等，因此在免疫学实验中广泛应用。

2. 应用场景

HRP酶标二抗常用于如免疫印迹（WB）、酶联免疫吸附试验（ELISA）以及免疫组织化学（IHC）等实验。在这些实验中，HRP标记的二抗与底物反应，产生可检测的化学发光信号，从而实现目标蛋白的检测。例如，在WB实验中，HRP酶标二抗能够检测样品中的特定蛋白，并通过ECL试剂显色，使信号可视化。
 

HRP在不同实验中对应的底物及检测原理和方法

实验	底物	检测原理和方法
WB	Luminol和H2O2	鲁米诺在碱性条件下与过氧化氢（H2O2）反应，在辣根过氧化物酶（HRP）的催化下产生化学发光信号，可用CCD凝胶成像仪进行检测。
Elisa	TMB	在HRP的作用下，TMB被氧化并产生蓝色产物，随后在强酸条件下变为黄色。使用酶标仪在450nm波长下进行检测。
HIC	DAB	DAB常用于组织化学和免疫组化实验，与HRP反应后形成不溶性棕色沉淀物，可以使用光学显微镜检测。

二、荧光二抗

1. 定义及特性

荧光二抗，即带有荧光基团的二抗，能够在激发光下发出荧光信号。常用的荧光基团包括Cy3、Cy5、Alexa Fluor等。这些荧光基团具有不同的激发和发射波长，可以实现多标染色实验中的不同颜色标记。

2. 应用场景

荧光二抗广泛应用于免疫荧光（IF）、免疫细胞化学（ICC）以及流式细胞仪（Flow cytometry）等实验。在这些实验中，荧光二抗与目标蛋白结合后，通过荧光显微镜或流式细胞仪等设备检测荧光信号，从而实现目标蛋白的定位和定量。例如，在IF实验中，荧光二抗可以标记细胞内的特定蛋白，并通过荧光显微镜观察其在细胞内的分布和表达情况。

3. 多标染色实验

荧光二抗在多标染色实验中具有独特优势。通过选择不同激发和发射波长的荧光基团，可以实现多种目标蛋白的同时检测。例如，可以使用Alexa Fluor 488和Alexa Fluor 594两种荧光基团分别标记两种不同的目标蛋白，并通过荧光显微镜同时观察它们在细胞内的分布和表达情况。

 

 

三、酶标二抗和荧光二抗的对比

HRP酶标二抗和荧光二抗各具特色，分别在不同的实验场景下发挥关键作用。HRP酶标二抗以其高灵敏度和稳定性在WB、ELISA和IHC等实验中广泛应用；而荧光二抗则以其独特的荧光信号和多标染色能力在IF、ICC和流式细胞仪等实验中展现出独特优势。在实验中，应根据具体需求和实验条件选择合适的二抗类型，以提高实验的准确性和可靠性。

	HRP酶标二抗	荧光二抗
定义	辣根过氧化物酶（HRP）标记的二抗	带有荧光基团的二抗
特性	催化底物产生化学发光信号	在激发光下发出荧光信号
应用场景	免疫印迹（WB）、酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫组织化学（IHC）等	免疫荧光（IF）、免疫细胞化学（ICC）、流式细胞仪（Flow cytometry）等
灵敏度	高，可挑战fg级别	中等至高，取决于荧光基团和检测设备
多标染色	不适用于多标染色	适用于多标染色，可同时检测多种目标蛋白
信号稳定性	相对稳定，不易受外界因素影响	对光敏感，需避免长时间暴露于强光下
可视化方法	化学发光成像（如ECL试剂显色）	荧光显微镜或流式细胞仪检测
操作简便性	操作相对简单，但可能涉及化学发光底物的处理	操作简便，直接通过荧光显微镜或流式细胞仪观察
成本	相对较低（基于常规生化试剂）	可能较高，尤其是高级荧光显微镜和流式细胞仪的使用
优点	高灵敏度、稳定性好、成本相对较低	多标染色能力强、可视化效果好、操作简便
缺点	不适用于多标染色、对底物量有一定要求	对光敏感、成本可能较高

 

关于JacksonImmunoresearch
Jackson lmmunoResearch公司是美国著名的二抗及相关免疫产品生产厂商，其中二抗产品，具有产品新、多、全、纯度高，特异性强、应用广、背景干净、性价比高的特点，深受广大科研人员和企业的认可，销售范围遍布全球，一直享有“二抗金标准”的赞誉。
 

Jackson部分热卖货号
稀释比：
WB(化学发光底物)：1:10,000 - 1:200,000
ELISA：1:5,000 - 1:100,000
IHC/ICC：1:500 - 1:5,000

货号	名称	规格
111-035-003（热卖）	Peroxidase AffiniPure™ Goat Anti-Rabbit IgG (H+L)	2 ml
115-035-003（热卖）	Peroxidase AffiniPure™ Goat Anti-Mouse IgG (H+L)	2 ml
705-035-003	Peroxidase AffiniPure™ Donkey Anti-Goat IgG (H+L)	2 ml
115-545-003	Alexa Fluor® 488-conjugated AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG (H+L)	1.5mg
111-545-003	Alexa Fluor® 488-conjugated AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG (H+L)	1.5mg
115-585-003	Alexa Fluor® 594-conjugated AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG (H+L)	1.5mg
111-585-003	Alexa Fluor® 594-conjugated AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG (H+L)	1.5mg
705-605-003	Alexa Fluor® 647-conjugated AffiniPure Donkey Anti-Goat IgG (H+L)	1mg
115-605-003	Alexa Fluor® 647-conjugated AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG (H+L)	1.5mg
111-605-003	Alexa Fluor® 647-conjugated AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG (H+L)	1.5mg
115-165-003	Cy3-conjugated AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG (H+L)	2mg
111-165-003	Cy3-conjugated AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG (H+L)	2mg
115-095-003	Fluorescein (FITC)-conjugated AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG (H+L)	2mg
111-095-003	Fluorescein (FITC)-conjugated AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG (H+L)	2mg

国产斯达特（STARTER）高性价比

货号	名称	规格
S0B4002	Goat anti-Rabbit IgG(H+L), HRP	100ul/1ml/5ml
S0B4006	Goat anti-Mouse IgG(H+L), HRP	100ul/1ml/5ml
S0B4016	Goat Anti-Rabbit IgG mAb, HRP	100ul/1ml/5ml
S0B4005	Goat anti-Rabbit IgG (H+L) (Alexa Fluor 647 Conjugate)	25ul/100ul/1ml
S0B4004	Goat anti-Rabbit IgG(H+L) (Alexa Fluor 488 Conjugate)	25ul/100ul/1ml
S0B4007	Goat anti-Rabbit IgG(H+L) (Alexa Fluor 594 Conjugate)	25ul/100ul/1ml
S0B4017	Goat anti-Mouse IgG(H+L) (Alexa Fluor 488 Conjugate)	25ul/100ul/1ml
S0B4010	Goat anti-Mouse IgG(H+L) (Alexa Fluor 594 Conjugate)	25ul/100ul/1ml
S0B4008	Goat anti-Mouse IgG(H+L) (Alexa Fluor 647 Conjugate)	25ul/100ul/1ml