多色荧光如果两个一抗同种属来源怎么办？

在免疫荧光实验中，我们常常会在一张切片上共染2-3个指标，有的时候因为靶标的抗体不好找，或者想用已有的抗体进行实验，可能会遇到两个一抗同种属来源的情况。此时如果我们还是按照常规的步骤进行实验，因为两个一抗是同种属来源，那么两个二抗的反应种属也相同，必然会产生严重的染色交叉污染的情况。不过这种情况还是可以通过特殊的处理来避免，如果一定要使用两个同种属的一抗做双标免疫荧光，可以按照以下的3种方法进行实验。

 

方法一：使用荧光Fab片段进行标记和封闭
1、使用正常的血清封闭之后，孵育第一个一抗。这里的血清建议和两个二抗同种属来源。
 

2、孵育过量的带荧光标记的Fab片段。这里过量的Fab片段可以完全封闭一抗的可结合位点，并且因为Fab仅带有1个结合位点，所以也不会和第二个一抗有结合，避免了交叉污染。
 

3、孵育第二个一抗。
 

4、孵育第二个带有荧光标记的二抗。这个二抗需要和Fab片段同种属来源。
 

 

方法二：使用无标记Fab片段替换一抗种属 
1、使用正常的血清封闭之后，孵育第一个一抗。这里的血清建议和两个二抗同种属来源。
 

2、孵育过量的Fab片段。此Fab片段和一抗来源于不同的种属，目的是替换一抗的种属来源。
 

3、孵育带有荧光标记的二抗，此二抗的反应种属和Fab片段的种属来源相同。
 

4、孵育第二个一抗。
 

5、孵育第二个荧光标记二抗，这个二抗需要和前一个二抗同种属来源。
 

方法三：血清和Fab片段做连续封闭
1、使用正常的血清封闭之后，孵育第一个一抗。这里的血清建议和两个二抗同种属来源。
 

2、孵育带有荧光标记的二抗。
 

3、用血清进行封闭。这里的血清需要和一抗种属来源相同。目的主要是为了完全封闭二抗上的所有位点，使其不会和第二个一抗结合。
 

4、孵育过量的Fab片段。这里Fab片段的反应种属和一抗种属来源相同。目的是为了封闭上一步的血清IgG的所有位点从而使其不会和第二个二抗结合。
 

5、孵育第二个一抗。
 

6、孵育带有荧光标记的二抗，这个二抗需要和前一个二抗同种属来源。
 

 

关于JacksonImmunoresearch
Jackson lmmunoResearch公司是美国著名的二抗及相关免疫产品生产厂商，其中二抗产品，具有产品新、多、全、纯度高，特异性强、应用广、背景干净、性价比高的特点，深受广大科研人员和企业的认可，销售范围遍布全球，一直享有“二抗金标准”的赞誉。

 

Jackson部分热卖货号

货号	产品	规格
115-545-003	Alexa Fluor® 488-conjugated AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG (H+L)	1.5mg
111-545-003	Alexa Fluor® 488-conjugated AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG (H+L)	1.5mg
115-585-003	Alexa Fluor® 594-conjugated AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG (H+L)	1.5mg
111-585-003	Alexa Fluor® 594-conjugated AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG (H+L)	1.5mg
115-605-003	Alexa Fluor® 647-conjugated AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG (H+L)	1.5mg
111-605-003	Alexa Fluor® 647-conjugated AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG (H+L)	1.5mg
115-165-003	Cy3-conjugated AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG (H+L)	2mg
111-165-003	Cy3-conjugated AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG (H+L)	2mg
115-095-003	Fluorescein (FITC)-conjugated AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG (H+L)	2mg
111-095-003	Fluorescein (FITC)-conjugated AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG (H+L)	2mg
111-545-144	Alexa Fluor® 488-conjugated AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG (H+L) (min X Hu,Ms,Rat Sr Prot)	1mg
711-585-152	Alexa Fluor® 594-conjugated AffiniPure Donkey Anti-Rabbit IgG (H+L) (min X Bov,Ck,Gt,GP,Sy Hms,Hrs,Hu,Ms,Rat,Shp Sr Prot)	0.5mg
711-605-152	Alexa Fluor® 647-conjugated AffiniPure Donkey Anti-Rabbit IgG (H+L) (min X Bov,Ck,Gt,GP,Sy Hms,Hrs,Hu,Ms,Rat,Shp Sr Prot)	0.5mg
711-095-152	Fluorescein (FITC)-conjugated AffiniPure Donkey Anti-Rabbit IgG (H+L) (min X Bov,Ck,Gt,GP,Sy Hms,Hrs,Hu,Ms,Rat,Shp Sr Prot)	0.5mg
711-225-152	Cy2-conjugated AffiniPure Donkey Anti-Rabbit IgG (H+L) (min X Bov,Ck,Gt,GP,Sy Hms,Hrs,Hu,Ms,Rat,Shp Sr Prot)	0.5mg
711-165-152	Cy3-conjugated AffiniPure Donkey Anti-Rabbit IgG (H+L) (min X Bov,Ck,Gt,GP,Sy Hms,Hrs,Hu,Ms,Rat,Shp Sr Prot)	1.5mg
712-175-153	Cy5-conjugated AffiniPure Donkey Anti-Rat IgG (H+L) (min X Bov,Ck,Gt,GP,Sy Hms,Hrs,Hu,Ms,Rb,Shp Sr Prot)	0.5mg
705-675-147	Brilliant Violet™ 421-conjugated AffiniPure Donkey Anti-Goat IgG (H+L) (min X Ck,GP,Sy Hms,Hrs,Hu,Ms,Rb,Rat Sr Prot)	0.25ml
115-685-166	Brilliant Violet™ 480-conjugated AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG (H+L) (min X Hu,Bov,Hrs,Rb,Rat Sr Prot)	0.25ml
111-007-003	AffiniPure™ Fab Fragment Goat Anti-Rabbit IgG (H+L)	1mg
111-547-003	Alexa Fluor® 488 AffiniPure™ Fab Fragment Goat Anti-Rabbit IgG (H+L)	0.75mg
115-007-003	AffiniPure™ Fab Fragment Goat Anti-Mouse IgG (H+L)	1mg
115-547-003	Alexa Fluor® 488 AffiniPure™ Fab Fragment Goat Anti-Mouse IgG (H+L) Conjugate Options	0.75mg

 

国产优质品牌斯达特（STARTER)精选荧光二抗

货号	产品	规格
S0B4005	Goat anti-Rabbit IgG (H+L) (Alexa Fluor 647 Conjugate)	25ul/100ul/1ml
S0B4004	Goat anti-Rabbit IgG(H+L) (Alexa Fluor 488 Conjugate)	25ul/100ul/1ml
S0B4007	Goat anti-Rabbit IgG(H+L) (Alexa Fluor 594 Conjugate)	25ul/100ul/1ml
S0B4017	Goat anti-Mouse IgG(H+L) (Alexa Fluor 488 Conjugate)	25ul/100ul/1ml
S0B4010	Goat anti-Mouse IgG(H+L) (Alexa Fluor 594 Conjugate)	25ul/100ul/1ml
S0B4008	Goat anti-Mouse IgG(H+L) (Alexa Fluor 647 Conjugate)	25ul/100ul/1ml