FLAG标签-高效的蛋白质检测和纯化标签

FLAG标签与Strep-Tag II相类似，是一个简短的由8个氨基酸（DYKDDDDK）构成的亲和标签，常被用于检测和纯化目标蛋白质。其中，一个增强的版本是3xFLAG-tag，它由三个连续的FLAG类似序列组成，提供了更高的亲和力。FLAG-Tag分子量小（1.01kDa），可以轻松融合到重组蛋白中，而不遮蔽融合蛋白的其他蛋白表位或结构域，同时不影响其功能、分泌及转运。由于FLAG-Tag的亲水性，它倾向于位于融合蛋白的表面，从而更易于被抗体识别。

FLAG标签的氨基酸序列

FLAG标签与多种特异性抗FLAG单克隆抗体（如M1、M2和M5）结合，每种抗体具有独特的识别和结合特性。这个标签在原核（如大肠杆菌）和真核（如哺乳动物细胞、酵母）表达系统中都得到了广泛应用。

特别地，FLAG标签包含肠激酶切割位点DDDDK，这使得在融合蛋白纯化后能够干净地去除整个标签。肠激酶在广泛的pH值和表面活性剂范围内具有高活性，对其五肽识别序列具有特异性，并在识别位点的羧基末端进行裂解，不会在融合蛋白上留下任何残余的Tag氨基酸。

关于抗FLAG-Tag单克隆抗体，有三种类型：M1、M2和M5。M1抗体与FLAG-Tag的结合是钙依赖性的，通常用于鉴定和纯化N端带有FLAG-Tag的重组蛋白，但不能用于C端融合的FLAG-Tag蛋白。M2抗体则不受钙的影响，对N端和C端FLAG-Tag融合蛋白都适用，应用范围更广。M5抗体同样不是钙依赖性的，但对N端FLAG融合蛋白（FLAG-Tag前为蛋氨酸）表现出更高的亲和力，是检测细胞质表达的FLAG-Tag融合蛋白的首选。

在FLAG-Tag融合蛋白的纯化过程中，主要包括结合、洗杂、洗脱和柱再生等步骤。以哺乳动物细胞表达的融合蛋白纯化为例，具体步骤包括准备溶液、收集细胞、细胞裂解、样品纯化（层析柱法）以及填料再生和清洗。在纯化过程中，可以使用酸洗脱或FLAG多肽竞争洗脱的方法来洗脱目的蛋白。

总的来说，FLAG-Tag标签是一个功能强大且灵活的亲和标签，能够用于各种表达系统中的蛋白质检测和纯化。