一文了解TR-FRET技术

什么是TR-FRET？

TR-FRET（Time-Resolved Fluorescence Resonance Energy Transfer，时间分辨荧光共振能量转移）是一种用于研究分子间相互作用的生物物理技术。它结合了两种技术：荧光共振能量转移（FRET）和时间分辨荧光（TRF，Time-Resolved Fluorescence）。

 

荧光共振能量转移原理图

荧光共振能量转移（FRET） 是一种物理现象，其中一个荧光分子（供体）在吸收光能后，可以将激发能量非放射性地传递给另一个分子（受体），如果受体在空间上足够接近供体（通常在1-10纳米范围内）。这种能量转移的效率与供体和受体之间的距离的六次方成反比，因此可以用来研究分子间的接近程度和相互作用。

 

时间分辨荧光原理图
 

时间分辨荧光（TRF） 是一种测量荧光寿命的技术，它通过在停止激发光源后测量荧光衰减来区分短寿命的背景荧光和长寿命的信号荧光。这允许在激发后的一个特定时间窗口内测量荧光，从而减少背景干扰，提高信号的信噪比。

在TR-FRET中，通常使用长寿命的供体荧光团，如镧系元素（如铕或铽）的螯合物，这些供体的荧光寿命较长，可以在激发后的一个延迟时间内被检测，此时短寿命的背景荧光已经衰减。受体荧光团通常是有机染料或另一种金属螯合物，其发射波长与供体的发射波长不同。

TR-FRET能做什么？
受体结合研究：
例如，研究者可能对一种新药如何与心脏药物靶标β-肾上腺素受体结合感兴趣。可以将β-肾上腺素受体标记上铕（Eu）作为供体，将药物分子标记上一个合适的受体荧光团。
当药物与受体结合时，观察到的FRET信号增加，从而可以定量分析药物的结合亲和力。

 

酶活性检测：
假设要研究一种新型抑制剂对酪氨酸激酶活性的影响。可以将激酶的底物标记上供体荧光团，并将激酶标记上受体荧光团。在没有抑制剂的情况下，激酶会磷酸化底物，导致两者分离，FRET信号减少。添加抑制剂后，如果FRET信号保持高水平，表明抑制剂阻止了激酶的活性。

 

蛋白质-蛋白质相互作用：
研究肿瘤抑制蛋白p53与MDM2之间的相互作用。将p53标记上供体荧光团，将MDM2标记上受体荧光团。当p53与MDM2相互作用时，FRET信号增加，可以用来研究这种相互作用的动力学和调控机制。

 

药物筛选：
在药物开发过程中，TR-FRET可以用来高通量筛选化合物库，以找到与特定靶标结合的潜在药物候选物。
例如，通过将G蛋白偶联受体（GPCR）标记上供体和受体荧光团，可以筛选能够激活或抑制该受体的化合物。

与ELISA相比，TR-FRET有什么优缺点？
 

abs7311 微孔板（384孔板，白色，浅孔）

与ELISA相比，TR-FRET具有以下优点：
高灵敏度：TR-FRET技术利用长寿命的荧光标记（如镧系元素），可以在较长时间内检测到信号，从而提高检测的灵敏度。
高稳定性：由于使用了时间分辨检测，可以减少背景噪声，提高信号的稳定性。
无需洗涤步骤：TR-FRET实验通常是均相的，不需要洗涤步骤，简化了操作流程。
节省样本：TR-FRET搭配96（abs7308 微孔板（96孔板，白色，浅孔））或384孔板（abs7311 微孔板（384孔板，白色，浅孔），384孔板一般每孔仅需要10ul样本。
线性范围广：可以同时检测高浓度和低浓度的样品。
快速：TR-FRET实验通常可以在1小时内完成，包括信号的产生和检测。

但是由于TR-FRET实验需要特殊的荧光标记和时间分辨荧光读板机（TRF Reader），这可能比传统的ELISA成本更高。技术层面，TR-FRET技术可能需要更多的技术知识和专业设备来进行实验和数据分析。

absin能为客户提供的TR-FRET产品有哪些？
除以上提到的96孔和384孔微孔板以外，absin还可以提供Human KRAS & cRAF系列、Human IgG 系列、DDB1-CRBN&GSPT1系列的检测试剂盒。

1、Human KRAS & cRAF系列
省力：无需洗涤
省时：仅需1h孵育
省样本：20ul/孔或更低反应体系
高通量：96/384/1536微孔板均可搭配

货号	产品名称	规格
abs560003	Human KRAS WT&cRAF Binding Kit	500T
abs560004	Human KRAS G12C&cRAF Binding Kit	500T
abs560005	Human KRAS G12D&cRAF Binding Kit	500T
abs560006	Human KRAS G12R&cRAF Binding Kit	500T
abs560007	Human KRAS G12V&cRAF Binding Kit	500T
abs560008	Human KRAS G13C&cRAF Binding Kit	500T
abs560009	Human KRAS G13D&cRAF Binding Kit	500T
abs560010	Human KRAS Q61H&cRAF Binding Kit	500T

 

数据实例（以abs560004 Human KRAS G12C&cRAF Binding Kit为例）：
以下数据不能代替实验中获得的数据，只作为示例，结果可能因TR-FRET兼容仪器而异。
  

 

 

2、Human IgG 系列

 

abs560002 Human Total IgG Kit(Assay Pro) 竞争法

abs560011 Human IgG Sandwich Assay Kit 夹心法

 

货号	产品名称	规格	样品浓度范围
abs560002	Human Total IgG Kit(Assay Pro)	100T/500T/10000T	1.22-80000ng/mL
abs560011	Human IgG Sandwich Assay Kit	100T/500T/5000T/10000T	3.9-4000ng/mL

数据实例
以下数据不能代替实验中获得的数据，只作为示例，结果可能因TR-FRET兼容仪器而异。

abs560002 Human Total IgG Kit(Assay Pro) 竞争法

 

 

 

abs560011 Human IgG Sandwich Assay Kit 夹心法

 

 

 

3、Human DDB1-CRBN&GSPT1系列

 

 

用于测定分子胶CC-885及待检测化合物介导的DDB1/CRBN复合体与GSPT1相互作用。是实现简单快速的检测能够介导DDB1/CRBN复合体与GSPT1相互作用的小分子的高通量方法。

货号	产品名称	规格
abs560012	Human DDB1-CRBN&GSPT1 Binding Kit	500T

数据示例
以下数据不能代替实验中获得的数据，只作为示例，结果可能因TR-FRET兼容仪器而异。