解读 Cisbio - HTRF®技术

HTRF®，即均相时间分辨荧光（Homogeneous Time-Resolved Fluorescence）技术，是一种专注于纯液相体系中待测物检测的先进技术手段。它巧妙融合了荧光共振能量转移（FRET）与时间分辨荧光（TRF）这两项关键技术，由此打造出一款在高通量药物筛选领域极具威力的工具，能够高效、精准地对纯液相环境里的各类待测物展开检测分析，为药物研发进程中的筛选工作提供了强有力的技术依托，极大地推动了相关领域的研究与开发工作迈向新的高度。

荧光共振能量转移（FRET）是一种基于两种荧光基团间能量转移的现象，这两个基团分别被称为能量供体（Donor）和能量受体（Acceptor）。当供体分子被外部光源激发后，如果它与受体分子的距离足够近，就能将能量非辐射地传递给受体分子，导致受体分子激发并发出特定波长的光。通过将供体和受体与两个相互作用的生物分子结合，可以利用分子间的相互作用拉近供体和受体的距离，从而产生能量转移。这种方法的优势在于，由于受体的发射光源自能量转移，实验过程中无需分离未结合和已结合的分子，因此不需要洗涤步骤。

时间分辨荧光（TRF）技术则利用了稀土元素中镧系元素的独特性质，与普通荧光相比，镧系元素的荧光半衰期要长得多，这个时间延迟使得TRF技术能够在普通荧光信号衰减至几乎为零后进行检测，从而大幅降低背景噪音，更准确地反映样品的实际状况。

HTRF®技术的能量供体是铕(Eu)和钛(Tb)的穴状化合物，这种结构由J.M.Lehn教授发明，并因此获得了1987年的诺贝尔奖。HTRF®的能量受体有两种，XL665和d2，它们具有相同的光学性质但分子量不同，前者为10KD，实际上是一种别藻蓝蛋白（APC），通过将APC的亚基偶联在一起提高稳定性；后者分子量为1KD，在某些实验中具有独特的优势。

HTRF® 技术展现出诸多显著优势：其一，操作极为简便，可直接于空板进行加样操作，加样完毕便能即刻开展检测，耗时极短，从加样到孵育仅需 2 小时。其二，对珍贵样本极为友好，整个实验体系仅需 20 微升样本量。其三，采用均相检测模式，无需包被步骤，属于免洗的 ELISA 类型，能大幅节省时间与精力。其四，体系具备高度稳定性，在 7 天内可随时进行检测，且信号基本维持恒定。其五，数据真实可靠，通过比值处理有效削减背景荧光干扰，假阳性与假阴性率处于较低水平。其六，属于高端检测技术却仅需借助简单的酶标仪便可顺利实施，易于操作与应用。