THUNDER TR-FRET 时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）作为一种方便灵活的均相检测技术，现今已成为生命科学基础研究和药物研发中最为常用的检测方法之一。
THUNDER细胞因子检测，最受追捧的因素有哪些？——多、快、好、省
1）多：覆盖Human和Mouse，常见ILs、IFNs、TNFs、CCLs、CXCLs...
2）快：均相免洗无包被，孵育1~2h即可。
3）好：①动态范围宽，可达4~5log，减少样本稀释。检测上限部分可达30000pg/ml。
信号。②信号稳定：反复读值，信号衰减，延迟读值（过夜或更久），信号稳定可靠。③CV小：板内CV和批间CV均在5%~10%。④完全的数据验证：每个因子的检测均验证过灵敏度，特异性，准确性，线性范围等数据。
4）省：更灵活：省样本（仅15μl）。省成本，价格比ELISA更优惠。包装更灵活：100~10000 pionts均可提供，真正按需购买。
一、THUNDER细胞因子检测技术原理
THUNDER应用双抗夹心TR-FRET技术检测模型，一对特性抗体识别细胞因子后与其结合，用光（320~340nm）激发荧光供体产生FRET（615nm）信号进而激发荧光受体发射信号（665nm）。信号强度与细胞因子浓度成正比。
图1：THUNDER细胞因子检测示意图
图2：THUNDER细胞因子检测操作流程示意图
Tips：THUNDER TR-FRET 采用的荧光供体为镧系元素Eu Chelate，区别于HTRF TR-FRET 的Cryptate，构象更简单，且保持了足够的稳定性以及耐受性。
二、检测数据展示
三、完全验证包括以下几方面核心要素
一、细胞因子—灵敏度（SENSITIVITY ）
在进行灵敏度验证时，需要考虑样本中细胞因子的浓度范围、检测方法的最低检测限（LOD）和定量下限（LLOQ）。实验中使用的试剂、缓冲液和操作步骤的微小变化都可能影响细胞因子的检测。因此，实验条件的标准化和严格控制对于获得可靠结果至关重要。
图3：Human IFNγ KIT SENSITIVITY验证
THUNDER全部Biomaker灵敏度验证均展示在TDS中。
二、细胞因子—精密度（PRECISION）
1、细胞因子—INTRA-ASSAY PRECISION
在细胞因子检测中，分析内测定重复性（Intra-assay Precision）是指在相同实验条件下，对同一样本进行多次测量所得结果之间的一致性。它反映了实验操作的稳定性和可靠性，是评估检测方法性能的重要指标之一。分析内重复性的高低直接影响到实验结果的可信度和实验数据的统计分析质量。
THUNDER检测，在同一板上分别对三个已知浓度（低、中、高）的样品进行了20次测试，以评估分析内重复性。该检测在384孔板中进行，标准品和样品在Assay Buffer 1中制备。得到的低%CV（<10%）每个样品都表明检测中具有良好的重现性。
图4：Human IL2 KIT INTRA-ASSAY PRECISION验证
THUNDER全部Biomaker分析内重复性验证均展示在TDS中。
2、细胞因子—INTER-ASSAY PRECISION
在细胞因子检测中，分析间测定重复性（Inter-Assay Precision）是指在不同时间点、不同批次或不同操作者之间进行相同样本的多次测量所得结果之间的一致性。间测定重复性是评估检测方法在不同实验条件下的稳定性和可靠性的重要指标，对于确保实验结果的准确性和可重复性至关重要。
THUNDER评估分析间重复性测试了3个已知浓度的样品。使用两个批次试剂盒进行实验：384孔板，标准品和样品均用Buffer制备，三复孔检测。每个样品CV<10%，表明具有良好的重现性。
图5：Human IFNγ KIT INTER-ASSAY PRECISION验证
THUNDER全部Biomaker分析内和分析间重复性验证均展示在TDS中。
三、细胞因子—准确性（ACCURACY）
细胞因子的加标回收率（Spiked recovery）是评估细胞因子检测方法准确性的一个重要参数。它通过在已知浓度的样本中加入一定量的标准品，然后通过检测来评估检测方法能否准确测量出加入的标准物质的量。加标回收率的高低可以反映出检测方法的准确性、可靠性以及是否存在系统误差。通常，一个可接受的加标回收率范围会在85%-115%之间，这表明检测方法具有较好的准确性和可靠性。
THUNDER回收率测定，每个分析由一条标准曲线和三条标准曲线组成加标浓度（低、中和高），在Buffer、DMEM和RPMI（含10%FBS）中三复孔检测。根据9个孔的平均值计算平均回收率，并与在相应稀释剂中制备的标准曲线进行比较。数据显示，回收率值在80–120%范围内，表明分析准确可靠。
图6：Human IFNγ KIT RECOVERY验证
THUNDER全部Biomaker回收率验证均展示在TDS中。
四、细胞因子—稀释线性（LINEARITY）
细胞因子的稀释线性是指在进行细胞因子检测时，将样品进行系列稀释后，检测结果与稀释倍数之间是否呈现出良好的线性关系。这一指标对于确保检测方法的准确性和可靠性至关重要，尤其在样品中细胞因子浓度远高于标准曲线上限时，或者当样品基质可能影响检测结果时。
THUNDER评估分析的稀释线性，含10%FBS的培养基中加入高浓度分析物的样品并稀释。384孔板，含10%FBS培养基梯度稀释标准品。每个样品三复孔检测。数据显示，回收率值在80-120%之间，证实了分析的稀释线性好。
图7：Human IFNγ KIT LINEARITY验证
THUNDER全部Biomaker稀释线性验证均展示在TDS中。
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