RB(Retinoblastoma Protein,视网膜母细胞瘤蛋白)是细胞周期调控中的关键蛋白,磷酸化RB在细胞周期调控、基因表达、肿瘤发生以及癌症免疫中扮演着重要角色,其磷酸化状态的变化对细胞功能和疾病发展具有深远影响。
THUNDERTM TR-FRET时间分辨荧光共振能量转移是一种基于荧光共振能量转移(FRET,Fluorescence Resonance Energy Transfer)和时间分辨荧光(TRF, Time-Resolved Fluorescence)的技术,采用夹心法,检测胞内RB磷酸化水平和总RB水平。
图1:THUNDER TR-FRET检测原理示意图
THUNDER Phospho-Rb (S780)
HT-29细胞(40000个细胞/孔;三复孔)饥饿24小时,在37°C,5%二氧化碳下连续稀释孵育20小时。数据显示,用Palbocicilib处理HT-29细胞可抑制Rb在S780位点的磷酸化。Z’因子值在培养1h后测定,每个处理组共使用40孔。Z’因子值为0.72,表明该方法稳定,适用于高通量。
图2:THUNDER TR-FRET Phospho-Rb (S780)检测数据
THUNDER™ Phospho-Rb (S807/S811)
HT-29细胞(40000个细胞/孔;三复孔)饥饿24小时,在37°C,5%二氧化碳下连续稀释孵育20小时。数据显示,用Palbociclib处理HT-29细胞可抑制Rb在S807/S811位点的磷酸化。培养1h后测定Z’因子值,每个处理组共使用48个孔。Z’值为0.9,表明该方法稳定,适用于高通量。
图3:THUNDER TR-FRET Phospho-Rb (S807/S811)检测数据
THUNDER™ Total Rb
用Palbociclib处理HT-29细胞抑制总Rb,磷酸化Rb(S780)和磷酸化Rb(S807/S811)。GAPDH(作为对照测量)的水平保持稳定。
图4:THUNDER TR-FRET Total-Rb 检测数据
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品名 | 货号 | 规格 |
Phospho-Rb (S780) | KIT-RBS780P-500 | 500 pionts |
Phospho-Rb (S807/S811) | KIT-RBS807P-500 | 500 pionts |
Total Rb | KIT-RBT-500 | 500 pionts |
*磷酸化/总蛋白检测试剂提供以下规格:100 points,500 points,2500 points,5000 points,10000 points。