如何选择Ni-IDA、Ni-NTA、Ni-TED纯化His标签蛋白

如何选择Ni-IDA、Ni-NTA、Ni-TED纯化His标签蛋白

金属螯合亲和技术，凭借其能够利用蛋白质分子中的组氨酸、半胱氨酸、色氨酸残基与多种过渡金属离子的配位结合特性，在琼脂糖磁珠、琼脂糖填料等固相载体上偶联适当的螯合金属离子，从而制备出能选择性结合特定氨基酸残基蛋白质（如常用的组氨酸标签）的金属螯合亲和介质。

在选择Ni-IDA、Ni-NTA、Ni-TED磁珠或填料时，需综合考虑实验需求、样品特性、处理条件及成本等多个因素。以下是对这三种不同结构基团的详细比较及选择建议：

结构特性：

• IDA与金属离子形成三配位结构。
• NTA与金属离子形成四配位结构。
• TED与金属离子形成五配位结构。

磁珠或填料性能：

• Ni-IDA：
  • 稳定性：相对较弱。
  • 载量/纯度：蛋白载量高，但特异性低，纯化后的蛋白纯度相对较低。
  • 再生性：具备良好的再生能力。
  • 耐受性：对螯合剂EDTA和还原剂的耐受性一般。
• Ni-NTA：
  • 稳定性：较Ni-IDA更为稳定，能耐受更高的还原剂浓度。
  • 载量/纯度：蛋白载量和特异性均属中等，纯化后的蛋白纯度也中等。
  • 再生性：同样具备良好的再生能力。
  • 耐受性：对EDTA和还原剂的耐受性略高于Ni-IDA。
• Ni-TED：
  • 稳定性：非常出色。
  • 载量/纯度：结合蛋白量相对较低，但特异性高，纯化后的蛋白纯度高。
  • 再生性：可再生。
  • 耐受性：对EDTA和还原剂（如DTT）等具有很高的耐受性。

选择建议：

1. 样品特性：

   • 若样品中含有高浓度的EDTA或还原剂等对镍磁珠有影响的物质，首选Ni-TED，因其耐受性极高。
   • 若样品中无此类影响物质，可选择Ni-IDA（适用于需要高载量的实验）或Ni-NTA（适用于需要长时间使用的实验）。

2. 实验需求：

   • 若实验追求高纯度目标蛋白且对成本有要求，Ni-IDA因其高载量和可反复利用性而成为优选。
   • 若实验需要快速、高效地纯化目标蛋白，且对稳定性有较高要求，Ni-NTA因其良好的稳定性和批次重复性而更适合。
   • 若实验需处理含EDTA或还原剂等物质的样品，且对载量和稳定性要求不高，Ni-TED因其高耐受性而成为理想选择。

3. 成本：

   • 在选择时，需根据实验预算和长期需求进行权衡。虽然某些填料的初期成本可能较高，但若其载量高、稳定性好、可反复利用，则可能更具经济性。

综上所述，选择哪种磁珠或填料需根据具体实验需求、样品特性和成本等因素综合考虑。