Dexamethasone induces an imbalanced fetal-placental-maternal bile acid circulation: involvement of placental transporters

摘要

三阴性乳腺癌（Triple-Negative Breast Cancer, TNBC）是一种侵袭性极强的乳腺癌亚型，其特点是缺乏雌激素受体、孕激素受体和人表皮生长因子受体2的表达，因此对内分泌治疗和靶向治疗不敏感。IFI35是一种干扰素诱导蛋白，在多种免疫细胞中表达，但其在肿瘤免疫中的作用尚不明确。本研究旨在探讨IFI35在TNBC中的作用及其潜在机制。研究结果表明，IFI35通过促进CCL2的分泌，抑制了TNBC中的抗肿瘤免疫反应，从而促进了肿瘤的进展。这些发现为TNBC的免疫治疗提供了新的靶点。

一、引言

三阴性乳腺癌（TNBC）是一种高度侵袭性的乳腺癌亚型，其特点是缺乏雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）和人表皮生长因子受体2（HER2）的表达。由于缺乏这些受体，TNBC对内分泌治疗和HER2靶向治疗不敏感，治疗选择有限。目前，TNBC的主要治疗手段是化疗，但化疗的效果有限，且容易产生耐药性。近年来，免疫治疗在多种癌症中显示出良好的疗效，但在TNBC中的应用仍面临挑战。因此，寻找新的治疗靶点和策略对于改善TNBC患者的预后具有重要意义。

二、研究背景

IFI35是一种干扰素诱导蛋白，属于干扰素诱导蛋白家族（IFI家族）。IFI家族蛋白在免疫应答中发挥重要作用，能够调节多种免疫细胞的功能。在肿瘤微环境中，IFI家族蛋白的表达和功能受到肿瘤细胞的调控，从而影响肿瘤的进展和免疫反应。CCL2是一种趋化因子，能够招募单核细胞、巨噬细胞等免疫细胞到肿瘤微环境中。CCL2在多种肿瘤中表达上调，与肿瘤的侵袭和转移密切相关。然而，IFI35在TNBC中的作用及其与CCL2的关系尚不明确。

三、研究目的

本研究旨在探讨IFI35在TNBC中的作用及其潜在机制，特别是其是否通过CCL2分泌影响抗肿瘤免疫反应。具体研究目标包括：

评估IFI35在TNBC组织中的表达水平及其与临床病理特征的关系。
研究IFI35对TNBC细胞生物学行为的影响，包括增殖、迁移和侵袭。
探讨IFI35对TNBC免疫微环境的影响，特别是其是否通过CCL2分泌调节免疫细胞的浸润和功能。
评估IFI35作为TNBC治疗靶点的潜力。

四、研究方法

（一）临床样本分析

样本收集：收集TNBC患者的肿瘤组织和正常乳腺组织样本，以及相应的临床病理数据。
免疫组化染色：使用IFI35特异性抗体对组织样本进行免疫组化染色，评估IFI35的表达水平。
统计分析：分析IFI35表达水平与临床病理特征（如肿瘤大小、淋巴结转移、分期等）的关系。

（二）细胞实验

细胞培养：培养TNBC细胞系（如MDA-MB-231、BT549等），并进行IFI35基因敲除或过表达处理。
细胞增殖实验：使用CCK-8试剂盒检测细胞的增殖能力。
细胞迁移和侵袭实验：使用Transwell小室检测细胞的迁移和侵袭能力。
流式细胞术：检测细胞表面标志物的表达，如CD80、CD86等。

（三）动物实验

动物模型建立：将TNBC细胞接种到免疫缺陷小鼠中，建立肿瘤模型。
肿瘤生长监测：定期测量肿瘤体积，评估肿瘤生长情况。
免疫细胞分析：使用流式细胞术检测肿瘤组织中免疫细胞的浸润情况，如T细胞、巨噬细胞等。

（四）分子机制研究

RNA提取和qRT-PCR：提取细胞或组织的总RNA，检测CCL2等基因的表达水平。
Western Blot：检测CCL2等蛋白的表达水平。
ELISA：检测细胞培养上清或组织匀浆中CCL2的分泌水平。
免疫共沉淀：检测IFI35与CCL2之间的相互作用。

五、研究结果

（一）IFI35在TNBC中的表达及其临床意义

表达水平：免疫组化结果显示，IFI35在TNBC组织中的表达水平显著高于正常乳腺组织。
临床相关性：统计分析表明，IFI35高表达与肿瘤大小、淋巴结转移和晚期分期显著相关，提示IFI35可能是TNBC预后不良的标志物。

（二）IFI35对TNBC细胞生物学行为的影响

增殖能力：CCK-8实验结果显示，IFI35过表达的TNBC细胞增殖能力显著增强，而IFI35敲除的细胞增殖能力显著减弱。
迁移和侵袭能力：Transwell实验结果显示，IFI35过表达的TNBC细胞迁移和侵袭能力显著增强，而IFI35敲除的细胞迁移和侵袭能力显著减弱。

（三）IFI35对TNBC免疫微环境的影响

CCL2分泌：qRT-PCR和Western Blot结果显示，IFI35过表达的TNBC细胞CCL2的表达水平显著上调，而IFI35敲除的细胞CCL2的表达水平显著下调。ELISA检测结果显示，IFI35过表达的细胞培养上清中CCL2的分泌水平显著增加。
免疫细胞浸润：流式细胞术检测结果显示，IFI35过表达的TNBC细胞培养上清中，巨噬细胞的浸润显著增加，而T细胞的浸润显著减少。
免疫抑制：动物实验结果显示，IFI35过表达的肿瘤组织中，T细胞的浸润显著减少，巨噬细胞的浸润显著增加，提示IFI35通过CCL2分泌抑制了抗肿瘤免疫反应。

（四）IFI35与CCL2的相互作用

分子机制：免疫共沉淀结果显示，IFI35与CCL2之间存在直接的相互作用，提示IFI35可能通过直接调控CCL2的表达和分泌来影响免疫微环境。
信号通路：Western Blot结果显示，IFI35过表达的TNBC细胞中，NF-κB信号通路的活性显著增强，而IFI35敲除的细胞中，NF-κB信号通路的活性显著减弱，提示IFI35可能通过NF-κB信号通路调控CCL2的表达。

六、研究结论

本研究表明，IFI35在TNBC中高表达，且与肿瘤的侵袭和预后不良显著相关。IFI35通过促进CCL2的分泌，抑制了TNBC中的抗肿瘤免疫反应，从而促进了肿瘤的进展。这些发现为TNBC的免疫治疗提供了新的靶点，即通过抑制IFI35的表达或功能，可以减少CCL2的分泌，增强抗肿瘤免疫反应，从而抑制TNBC的进展。

七、研究意义

创新性：本研究首次系统地探讨了IFI35在TNBC中的作用及其通过CCL2分泌影响抗肿瘤免疫的机制，为TNBC的免疫治疗提供了新的理论依据。
临床应用前景：通过抑制IFI35的表达或功能，可以减少CCL2的分泌，增强抗肿瘤免疫反应，为TNBC的治疗提供了新的策略。
理论贡献：本研究进一步揭示了TNBC免疫微环境的调控机制，丰富了对TNBC发病机制的认识。

八、研究展望

未来的研究可以进一步探讨IFI35在其他类型肿瘤中的作用及其在不同免疫细胞中的功能。此外，还可以研究IFI35与CCL2之间的相互作用机制，以及NF-κB信号通路在其中的作用，为开发新的免疫治疗药物提供理论支持。通过深入研究IFI35，有望为TNBC及其他癌症的治疗提供新的方法和思路。

名称	货号	规格
beta-Actin (8H10D10) Mouse mAb	3700S	100ul
beta-Actin (8H10D10) Mouse mAb	3700T	20ul
InVivoMAb anti-mouse PD-1 (CD279)	BE0146-50MG	50mg
InVivoMAb anti-mouse PD-1 (CD279)	BE0146-100MG	100MG

文献解析|IFI35 通过 CCL2 分泌限制三阴性乳腺癌的抗肿瘤免疫