RNA提取之Trizol法

在分子生物学研究中，RNA提取是非常重要的基础步骤，而提取效率和纯度直接影响后续实验的成功。Trizol试剂是一款高效、可靠的核酸提取试剂，为科研人员提供专业解决方案。

 

Trizol产品特点：

1、高效提取RNA

Trizol试剂基于经典的酸性酚-氯仿分离法，可从细胞、组织、植物等多种样本中快速提取高纯度的RNA。可满足多种实验需求，省时高效。

2、 高纯度

提取的RNA具有极高的纯度和完整性，A260/280值通常在1.8-2.0，完全满足分子生物学实验的要求。

3、适用范围广

样本类型：适用于细胞、组织、细菌、酵母和病毒等多种样本。

下游实验：提取的核酸可直用于Northern，点杂交，纯化mRNA，体外翻译，RNase protectionassay，cDNA克隆，以及RT-PCR；也可以用于基因表达芯片分析、高通量测序等对RNA质量要求较高的实验，保证结果的准确性和可靠性。

需要的试剂

 

试剂名称	应用
Trizol试剂(abs60154)	裂解样本
氯仿	离心后分离出上层水相(含RNA)
异丙醇	沉淀RNA
75%乙醇	洗涤沉淀的RNA
DEPC-ddH2O(abs9259)	溶解RNA

 

需要的耗材

 

货号	产品名称	规格
abs7119	1.5mL离心管(无菌无酶)	1箱
abs7118	0.5mL离心管(无菌无酶)	1箱
abs7071	10uL滤芯吸头(盒装,无菌无酶)	1箱
abs7074	200uL滤芯吸头(盒装,无菌无酶)	1箱
abs7077	1000uL滤芯吸头(盒装,无菌无酶)	1箱
abs7176	20uL滤芯吸头(盒装,无菌无酶)	1箱
abs7072	10uL吸头(盒装,无菌无酶)	1箱
abs7073	10uL吸头(袋装,无酶)	1箱
abs7075	200uL吸头(盒装,无菌无酶)	1箱
abs7076	200uL吸头(袋装,无酶)	1箱
abs7078	1000uL加长吸头(盒装,无菌无酶)	1箱
abs7079	1000uL吸头(盒装,无菌无酶)	1箱
abs7080	1000uL吸头(袋装,无酶)	1箱
abs7081	1000uL加长吸头(袋装,无酶)	1箱

 

操作步骤：

 

1、细胞裂解

组织样本

Trizol用量：每 50-100mg 组织加 1ml Trizol，样品体积不应超过 Trizol 体积的 10％。
（1）将动物或植物组织切成小块，在液氮中磨碎或用匀浆器匀浆处理。
（2）将研磨好的组织粉末快速转入装有 1ml Trizol 的 2ml 离心管中，在涡旋振荡器上迅速振荡混匀，置于冰上，待所有的样品研磨完。
（3）裂解产物应呈澄清的透明粘稠液体。对于富含蛋白、脂肪或多糖物质的组织样品如肌肉、脂肪组织和植物结节部位等，匀浆后仍会存留有不溶物质，可于 4℃ 12,000 x g 离心 10min，然后吸取上清至一新的离心管中。

细胞样本：
（1）贴壁细胞：吸尽培养液，每 10 cm2培养面积（6 孔板单孔或 35 mm 平皿）加入 1 ml Trizol，用加样器吹打数次，以确保细胞完全裂解，然后转移至离心管中。 注：Trizol 的使用量应由培养皿表面 积决定，而非由细胞数目决定。Trizol 量不足可能导致提取的 RNA 中有 DNA 污 染 。

（2）悬浮细胞：离心收集细胞，吸尽液体，每 5-10×106动植物或酵母细胞，或每 1×107细菌细胞加入 1ml Trizol， 用加样器吹打，使其完全裂解，然后转移至离心管中。 注：添加 Trizol 前切勿洗涤细胞 ，以免 RNA 降解。必要时可以用匀浆器来裂解某些细菌或者酵母细胞 。

2、液相分离

（1）裂解产物于室温放置 5 min，使核酸-蛋白复合物完全分离。（注：此时样品可在-80℃长期保存。 ）
（2）每 1 ml Trizol 加入 0.2 ml 氯仿，盖紧管盖，剧烈振荡 15 s，室温放置 2-3 min。
（3）4℃ 12,000 x g 离心 15 min，样品会分成三层：桔黄色的下层有机相，中间层和无色的上层水相。
（4）吸取含总 RNA 的上层水相至一新的离心管中，吸取水相的体积为所用 Trizol 试剂的 60％。

3、RNA 回收

（1）按照每 1ml Trizol 的最初使用量加入 0.5ml 异丙醇，颠倒数次混匀，室温放置 10min。
（2） 4℃ 12,000 x g 离心 10min，弃除上清，可见胶状的 RNA 沉淀。
（3）按照每1ml Trizol 的最初使用量加入1ml 75%乙醇，颠倒数次混匀，洗涤沉淀。
（4）4℃ 12,000 x g 离心 5min，弃除上清。
（5）室温倒置 5-10min 晾干或真空抽干（不要使用真空干燥离心机，以免 RNA 过干，难以溶解）。
（6）加入适量（如 25ul） DEPC-ddH₂O 或 TE 缓冲液，用加样器吹打数次溶解 RNA。
（7）通过 RNA 电泳以及紫外分光光度计检测，确定 RNA 的浓度、纯度和完整性。
（8）所得的 RNA 应立即使用或适量分装后-80℃保存，避免反复冻融。

仅需几步操作，即可得到高质量的RNA，简便且高效。除Trizol（abs60154）外，Absin还有Trizol(总RNA抽提试剂盒)（abs9331）包含有RNA提取全流程的试剂。

 

货号	产品名称	规格
abs60154	Trizol	500mL
abs9331	Trizol(总RNA抽提试剂盒)	1kit
abs9259	无酶无菌水	500mL