地高辛标记试剂盒（PCR法）

1、探针的标记长度应小于2.5kb，最佳标记长度在0.15kb-0.95kb 之间，片段过长易导致非特异杂交，片段过短往往会降低检测灵敏度。
2、说明书提供的反应条件仅供参考。探针标记前，请务必用本试剂盒以普通PCR 反应摸索标记条件，特别是退火和延伸的温度与时间、引物及模板量等关键参数，研究者可在本说明书提供的反应条件的基础上适当调整反应条件进行优化。本试剂盒提供了过量的PCR buffer 和Enzyme Mix.，可以支持研究者合理的优化实验。
3、模板的加入量，基因组DNA 在1-50 ng 之间，质粒DNA 在10-100 pg 之间为宜，具体用量可使用普通PCR 进行摸索，Ref. DNA 的用量为1ul。
4、PCR buffer、Dig Labelling 在加样前应轻轻手振混匀，PCR 反应液中不能有气泡，如发现气泡，应离心去除。
5、如需设置阳性对照或对标记反应进行质控，可使用试剂盒配置的Ref. DNA 和Ref. Primer 按上述反应条件进行PCR 标记，标记完成后可进行电泳或斑点杂交。
6、一般标记产物为双链DNA，如需标记单链DNA，可使用不对称PCR。
7、如PCR 标记的探针条带清晰，无杂带，可不需纯化，变性后直接加入预杂交液中使用，一般1 ml 预杂交液加入2 ul PCR 标记探针即可，如发现杂交背景较深，可减少探针用量至0.5-1 ul/ml 杂交液，如杂交信号较弱，则可适当增加探针的加入量。
8、PCR 仪应有热盖功能，如没有热盖功能，PCR 反应液上应添加石蜡油覆盖。
9、Dig Labelling 应保存于-20℃，在保存和使用过程中注意避光。