E.coli总RNA残留（qPCR）检测试剂盒

以质粒/Minicircle DNA为代表的DNA产品可以作为DNA疫苗产品的主要成分之一，也可作为病毒载体或DNA载体基因疗法的重要原料，病毒载体或非病毒载体细胞免疫疗法的重要原料。这些DNA产品的RNA残留可能影响其生物学活性（如干扰质粒的转染、表达效率）或造成风险（如外源RNA可激活细胞干扰素通路引发免疫反应），因此需建立DNA产品的RNA残留定量检测方法。
本试剂盒配套有E.coli RNA定量参考品可快速准确定量检测各种生物制品的中间品、半成品和成品中E.coli（DH5α、BL21等）宿主细胞RNA残留量。
       
产品特点：
本试剂盒利用荧光探针原理，可定量检测样品中E.coli 残留RNA。检测快速，专一性强，性能可靠，试剂盒线性范围为：200 pg/μL~0.002 pg/μL，最低检测限为2 fg/μL。

产品性能指标：
线性范围：200 pg/µL-0.002 pg/µL。  
标准品线性：R2≥0.980，扩增效率 90%≤Eff（%）≤110%，各浓度检测值 CV<15%。 
样本线性：依据 YY/T 1182-2020 的相关要求，在线性范围内，取接近线性范围上限的高值样本按一定比例（如 5 倍或 10 倍）稀释为至少 5 种浓度，其中低值浓度样本须接近线性范围的下限，将每一浓度样本检测 1 次或多次，计算每一浓度的对数均值和稀释比例(或理论浓度)的对数值，以浓度的对数均值为 Y，稀释比例(或理论浓度)的对数值为 X 进行线性拟合，计算其线性相关系数 r。  
准确度（加标回收率）：70%-130%。 
定量限：0.002 pg/µL，CV≤20%，测量偏差不大于|±20%|。  
精密度（重复性）：高、低两个浓度参考品各 10 次，变异系数 CV<15%。
阴性参考品符合率：比标准曲线中最低点高 2~3 个 Ct 值左右。  
适用机型（包括但不限于）：博日9600 FOD-96A；ABI 7500 Real-Time PCR System；Bio-Rad CFX Opus 96 Real-Time PCR System。 
冻融稳定性：5 次以上。

1、本试剂盒已通过稳定性（冻融等因素）的验证，无需分装。 
2、对样本前处理后，需要进行 DNase 处理以消除 gDNA 对检测的影响
3、阴性样品（E.coli RNA Primer&Probe MIX、One Step qRT-PCR Reaction MIX、One Step Enzyme MIX、RNA 稀释液）和阳性样品（参考品和待测样品等）的配制环境需区分区域，不可在一个区域内操作，配制人员需穿戴整齐，戴好口罩、手套和穿好洁净服。 
4、因为 RNA 容易被 RNA 酶降解，在涉及 RNA 的相关操作实验以及操作环境中需避免 RNA 酶的使用。如质粒提取过程中会涉及 RNA 酶的使用，则 RNA 检测时需避开其相关操作环境。 
5、注意在不同加样步骤间及时更换吸头，避免交叉污染，避免长时开盖，使用移液器移液时，需避免液体挂壁。 
6、试剂盒必须在有效期内使用，每次实验均需重新制备相应的标准曲线，不建议不同标准曲线之间混用，不建议不同批次的相关试剂混用。 
7、试剂盒内所有组分建议在低温环境融化后使用，且需确保其充分溶解，各组分使用前需充分混匀，以保证试剂的均一性，经混匀的试剂需经短暂离心，以使管壁及盖子上的液体全部集中于管底。 
8、操作过程建议在冰上进行。 
9、只有严格遵守说明书的操作方法，全部使用本试剂盒配套的试剂才能保证最佳检测效果。 
10、最终的实验结果与试剂的有效性、操作者的操作方法及实验环境密切相关。
11、公司只对试剂盒本身负责，不对因使用该试剂盒所造成的样本消耗负责，请使用者使用前充分考虑到样本的可能使用量，预留充足的样本。