2×Fast Pfu Master Mix

本制品是将PCR反应所需的Fast Pfu酶、dNTPs、MgCl₂、反应缓冲液以及优化剂以及稳定剂，预先配制成2倍浓度的混合物。2×Fast Pfu Master Mix专为扩增克隆DNA片段优化，高保真，错误率仅为1.3x10^-6。使用时只需在加入模板和引物并稀释到1倍浓度即可进行PCR反应，非常方便。较普通Pfu酶，2×Fast Pfu Master Mix具有快速、高灵敏度、抗干扰能力强等特点，能获得更理想的扩增结果，并大幅度缩短扩增反应时间，非常适用于1-20kb长片段的扩增。

产品特点：

高保真：具有同Pfu酶相同的保真度，为普通Taq酶的50倍。

灵敏：可从0.05ng人基因组DNA模板中扩增出特定基因片段（图例一）。

快速高效：Fast Pfu扩增速度为普通Pfu酶的数倍，72℃保温30秒可延伸1kb以上，可在较短时间内获得高产量的PCR产物。

快捷：PCR反应所必需试剂全集于一管之中，数分钟即可完成反应体系配制。

实验方法：

常用反应体系（50μl）：

*Mg ²⁺终浓度为2mM

常用PCR循环：

当扩增片段＜3K；

当扩增片段≥3K（推荐引物长度≥30bp）；

使用建议：

Fast Pfu DNA聚合酶产生的PCR产物为平滑末端，无3´端"A"突出，除使用PCR一步定向克隆试剂盒外，其它PCR产物的克隆方案有：

（1）PCR前引物进行5´端加磷修饰或将PCR产物磷酸化处理后再直接克隆于平滑末端的载体中。

（2）将产物3´末端加A后再与T载体连接。

（3）由于Fast Pfu DNA聚合酶的校对活性可引起引物从3´端被部分降解。因此在设计引物时应适当增加引物的长度，理想的引物长度为20-30mers。另外为了减少由3’→5´外切酶活性引起的引物降解，尽量在冰上配制反应体系。

质量保证：经检测无外源核酸酶残留；qPCR方法检测无大肠杆菌DNA残留；能有效扩增人基因组中的单拷贝基因。