SureENTRY Transduction Reagent

Performance

Cignal Finder Reporter Arrays可用于很多应用。

确定最佳药物剂量

在药物研发过程中，毒性是候选药物失败的主要原因。鉴定特定浓度或化合物的潜在毒性和细胞应答反应，对于今后的研究大有益处。有毒化合物或剂量会激活不同的应激反应通路。基于细胞的荧光素酶报告基因检测采用96孔板的形式，可用于检测10条应激反应通路。

衣霉素抑制GlcNAc phosphotransferase（GPT）酶，引起内质网应急反应。研究中，Stress and Toxicity 10-Pathway Reporter Array用于确定衣霉素的最低有效浓度，而不会激活胞内应急通路。结果表明，0.125 µg/ml衣霉素是抑制糖蛋白合成的最低有效浓度（参见"Identification of optimal drug dose"）。

癌症信号通路缺失的细胞应答

研究最成熟的肿瘤抑制基因是p53基因。为了对p53的生物功能有更多了解，检测受p53敲除影响的信号通路非常重要。Cancer 10-Pathway Reporter Array可帮助鉴定受p53敲除调控的关键癌症信号通路（参见"Signaling pathways affected by p53 knockdown"）。

结果表明，在HEK-293H细胞中，p53基因的敲除会下调p53信号，而上调Notch、缺氧和MAPK/ERK信号。Notch信号通常在人类恶性肿瘤中下调。p53 RNA干扰激活Noctch信号通路，表明Notch可能是一种原癌基因。

检测细胞因子相关的信号通路

肿瘤坏死因子α（TNFα）是多效炎症因子。研究TNFα调控的重要免疫信号通路非常重要。Immune Response 10-Pathway Cignal Finder Reporter Array能为研究TNFα生物应答相关的信号通路提供有用的信息。

Immune Response 10-Pathway Cignal Finder Reporter Array发现TNFα能激活HeLa细胞中的NFkB和MAPK/JNK信号通路（参见"Signaling pathways affected by TNFα"）。

Principle

不论是转染即用型管规格，还是孔板规格，每个芯片都包含10个Cignal Reporter Assays和2个对照。所有的报告基因检测都采用双荧光素酶技术。每个报告系统都是两种载体的混合物，一种是通路相关转录因子应答的萤火虫荧光素酶载体，一种是持续表达的海肾荧光素酶载体。

每个转染子的双荧光素酶结果都计算在内。通过比较处理与未处理转染子报告基因的标准化荧光素酶活性，可决定每个信号通路的活性变化。

相同处理的阴性对照作为特异性对照。阳性对照通过检测GFP表达情况，可作为转染效率对照，或检测萤火虫和海肾荧光素酶作为阳性对照。

Procedure

操作流程包括3个简单的步骤：

转染Cignal Reporter Assays，检测核酸进入细胞 

使用siRNA、蛋白、多肽或目标小分子进行处理 

使用荧光素酶活性检测对报告基因定量分析

Cignal Finder Reporter Array：管规格

Cignal Finder Reporter Arrays管规格采用12联管的形式，含有阳性和阴性对照。可即用于将报告基因系统转染或逆转染进入目的细胞株（参见"Cignal Finder Array, tube format procedure"）。

Cignal Finder Reporter Array：孔板规格

Cignal Finder Reporter Array孔板规格采用96孔板形式。每个报告基因和对照检测都在孔板的单个孔中进行（每个检测含8个孔，参见"Cignal Finder Array, plate format procedure"）。

Applications

Cignal Reporter Arrays非常适合研究表型相关的RNAi或过表达实验，小分子或化合物的生物应答，以及蛋白、多肽和配体的作用机理。