miScript Target Protector

Performance

特异性抑制miRNA对单个靶基因的调控

经修饰的miScript Target Protectors确保特异性、有效结合到目的miRNA结合位点。转染miScript Target Protector后，荧光素酶报告结构实验确保miRNA抑制的可靠性和可重复性（参见"Reliable miRNA inhibition"）。miScript Target Protectors保护靶基因的miRNA结合位点，同时不会影响这个miRNA对其它靶基因的调控（参见"miScript Target Protectors are specific for the gene of interest"）。

可靠验证miRNA-targeted基因

miScript Target Protectors用于验证基因是否被某个特定的miRNA调控。DNMT3A基因编码DNA甲基转移酶3，在发育和分化中起作用。TargetScan预测到DNMT3A的3' UTR上有miR-29a的单个结合位点。转染miR-29a miScript miRNA Mimic使DNMT3A基因表达下调，如real-time RT-PCR中所示，这表明miR-29a使DNMT3A在转染水平上表达下调。转染经TargetScan预测的miR-29a结合位点的miScript Target Protector，DNMT3A表达上升。这些实验表明DNMT3A被经TargetScan预测miR-29a结合位点负调控（参见"Target verification"）。

蛋白质水平的miRNA调控

miRNA可使基因表达在转染水平或蛋白质水平下调。miScript Target Protectors可从两个水平抑制miRNA调控。人类的BCL-2可被2种内源性表达的miRNAs调控：miR-15a和miR-16。miR-15a和miR-16使用BCL-2 3' UTR上相同的结合位点。转染miScript Target Protector，使BCL-2表达在蛋白质水平上升（参见"Inhibition of miRNA regulation of BCL-2"）。

miRNA调控对表型的影响

生命进程或信号通路受到影响，引起表型变化，如细胞形态变化或细胞活性变化。观察转染miScript Target Protector后细胞表型的变化，表明miRNA和靶基因在信号通路/生命进程中有关键作用。miR-9使对细胞活性有重要作用的基因表达下调。在MCF-7中，转染miR-9 miScript miRNA Mimic，引起细胞大量死亡。然而，miR-9 miScript miRNA Mimic和为基因mir-9结合位点设计的miScript Target Protector共转染，却没有细胞死亡。这表明miScript Target Protecto可抑制miR-9下调，细胞活性基因可以顺利表达（参见"Phenotype changes after miScript Target Protector transfection"）。

Principle

miScript Target Protector是一种新型的工具，可有效识别不同基因调控的miRNAs的作用。还可保护特定靶基因的miRNA结合位点。转染后，miScript Target Protector可结合到miRNA结合位点上，阻止miRNA结合到该位点上，避免其使基因表达下调。

Procedure

转染miScript Target Protector后，可进行表型和基因表达分析。靶基因表达增强、信号模式变化或表型改变都表明miRNA和靶基因在目标信号通路或表型中。转染不同的miScript Target Protectors后，通过特定的表型分析确定各种信号通路中miRNAs的作用。

QIAGEN提供的miRNA功能分析产品还包括miScript miRNA Mimics，一种合成的miRNAs，和miScript miRNA Inhibitors，抑制特定miRNA的所有靶基因的功能。miScript miRNA Mimics和Inhibitors配合miScript Target Protectors使用，可有效识别并发现miRNA的功能。

阳性和阴性对照

使用Positive和Negative Control miScript Target Protectors便于实验设置以及结果分析。Negative Control miScript Target Protector与任何已知的哺乳动物基因都不具有同源性。Positive Control miScript Target Protector保护miR-15a和miR-16调控下内源表达的BCL-2。转染Positive Control miScript Target Protector作为阳性对照，以确定实验设置是否正确。

Applications

miScript Target Protectors配合miScript miRNA Mimics和Inhibitors可用于多种miRNA功能研究，包括：

• 验证miRNA结合位点
• 通路或生命进程中的miRNA功能研究
• 研究靶基因调控
• 微阵列等分析结果的验证