One-Step RT-PCR Kit

One-Step RT-PCR Kit一步法RT-PCR试剂盒具有方便、快速、灵敏度高、重复性好等特点。该试剂盒能以动物、植物和微生物的总RNA或mRNA为模板，cDNA合成和PCR反应在一个管中进行，反转录结束后可直接进行PCR循环而不用增加额外的步骤；同时可对低至1fg的总RNA进行扩增，有助于大量样品的处理并减少污染机会。
产品组分：

组分	体积
RT Enzyme Mix	200ul
2× One-Step RT-PCR SuperMix	1ml×2
RNase Free Water	1ml×2

产品特点:

效率高，可反转录GC含量高，二级结构复杂的RNA模板。

独特的缓冲体系使反转录酶和聚合酶同时发挥最大功效。

操作简单，可最大限度的避免污染。

实验方法：

1、将 RNA 模板、引物、2×One-Step RT-PCR SuperMix，RT Enzyme Mix 和RNase Free Water 溶解并置于冰上备用。
2、配置以下反应体系：

模板RNA	0.1ng-5ug
RT Enzyme Mix	1ul
2×One-Step RT-PCR SuperMix	10ul
上游引物（10μM）	0.5-1ul
下游引物（10μM）	0.5-1ul
RNase Free Water	至 20ul

3、轻轻混匀后短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
4、常用反应程序：

42℃	5min/5000bp
95℃	5 分钟
25-30 次循环：	94℃，20 秒
	50-60℃，20 秒
	72℃，1kb/60 秒
72℃	5 分钟
4℃	保温

1、本试剂盒PCR扩增延伸时间为1kb/min，客户可根据具体片段长度进行延伸时间的调整。
2、通常情况，28～30个循环可达到最佳扩增，对于低拷贝目的基因的检测，可将循环数增加到40个。
3、如果同时操作多个样品，建议先在冰上先配制预混液，然后再分装到各个反应管中，加入模板启动反应。
4、反应出现目标条带拖带，系模板浓度过高或特异引物浓度不适等原因所致，可对模板及引物浓度等进行调整；反应出现杂带，可对退火温度进行调整，或重新设计特异性高的引物。
5、本试剂盒只需使用特异性反转录引物，无需使用Random Primer和OligodT Primer等进行反转录反应。
6、为了保证反应的正常进行，需使用高质量的RNA模板。