PfAgo核酸内切酶（RADAR用微球)

PfAgo 核酸内切酶（PfAgo Endonuclease ）来源于重组大肠杆菌，含有从激烈火球菌（Pyrococcus furiosus）中克隆的Argonaute（Ago）核酸酶基因，是一种依托引导序列（guide DNA）与靶核酸碱基互补配对，继而特异识别并剪切靶核酸的核酸内切酶。PfAgo 核酸内切酶剪切不受靶标序列和剪切位点相邻序列限制，对单链 DNA 靶核酸底物活性较高，对单链 RNA靶核酸底物也有一定活性。研究发现， PfAgo 在初级导向 DNA 介导下剪切靶标核酸，其产物可作为新生“次级”导向 DNA，与设计的特异性荧光报告分子作用，从而释放荧光信号实现靶标序列的信号读取。基于高温 Ago 对单链靶标核酸的次级剪切作用，PfAgo 可建立高灵敏度、高特异性的核酸检测新技术（Renewed gDNA Assisted DNA cleavage with Argonaute，RADAR），经测试本品（RADAR 用微球）可兼容不同的等温扩增试剂体系，特别地，针对市售多款 LAMP 试剂测试优化后，已形成“LAMP-RADAR 一管式”成熟试剂体系。该试剂体系可发挥 RADAR 对单碱基差异分型联检的优势，形成一管多重核酸检测新技术，使病毒基因检测达 aM 数量级。

热稳定：95℃ 1 小时，酶活性不损失。

单位定义：在 25 ul 反应体积中，95 ℃条件下反应 15 min，每分钟催化 0.1 nmol Target DNA 所需的 PfAgo 的蛋白量，定义为 1 个酶活力单位(U)。

产品组分：

RNase 残留检测：2 ug 本酶和 1 ug 293 Cell RNA 在 37℃下孵育 30 min，经琼脂糖凝胶电泳，RNA 的电泳谱带不发生变化。

核酸内切酶残留检测：2 ug 本酶与 0.3 ug pBR322 DNA 在 37℃下孵育 4 h，经琼脂糖凝胶电泳，质粒的电泳谱带不发生变化。

核酸外切酶残留检测：2 ug 本酶与 50 pmol 单链 DNA 底物和双链 DNA 底物在 37℃下孵育 16 h，经变性 PAGE 电泳，DNA的电泳谱带不发生变化。

大肠杆菌 DNA 残留检测：0.5 ug 本酶中残留的核酸经 E.coli gDNA 特异性的 TaqMan qPCR 检测，E.coli 基因组残留低于10拷贝。