2×Pfu Master Mix

本制品是将PCR反应所需的Pfu酶、dNTPs、MgCl₂、反应缓冲液以及优化剂和稳定剂，预先配制成2倍浓度的混合物。2×Pfu Master Mix专为扩增克隆DNA片段优化，高保真，错误率仅为1.3×10-6。使用时只需要加入模板和引物并稀释到1倍浓度即可进行PCR反应，非常方便。

产品特点：

高保真：Pfu DNA聚合酶是使用最广泛的高保真酶，其保真度为普通Taq酶的10倍。

灵敏：可从0.05ng人基因组DNA模板中扩增出特定基因片段。

快捷：PCR反应所必需试剂全集于一管之中，数分钟即可完成反应体系配制。

实验方法：

常用反应体系（50μl）：

*Mg ²⁺终浓度为2mM

常用PCR循环：

当扩增片段＜3K；

当扩增片段≥3K（推荐引物长度≥30bp）；

使用建议：

Pfu DNA聚合酶产生的PCR产物为平滑末端，无3´端"A"突出，除使用PCR一步定向克隆试剂盒外，其它PCR产物的克隆方案有：

（1）PCR前引物进行5´端加磷修饰或将PCR产物磷酸化处理后再直接克隆于平滑末端的载体中。

（2）将产物3´末端加A后再与T载体连接。

（3）由于Pfu DNA聚合酶的校对活性可引起引物从3´端被部分降解。因此在设计引物时应适当增加引物的长度，理想的引物长度为20-30mers。另外为了减少由3’→5´外切酶活性引起的引物降解，尽量在冰上配制反应体系。

经检测无外源核酸酶残留；qPCR方法检测无大肠杆菌DNA残留；能有效扩增人基因组中的单拷贝基因。