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毕赤酵母具有高等真核表达系统的许多优点:如蛋白加工、折叠、翻译后修饰等。不仅如此,操作时与 E.coli 及酿酒酵母同样简单。它比杆状病毒或哺乳动物细胞培养等其它真核表达系统更快捷、简单、廉价且表达水平更高。同为酵母,毕赤酵母具有与酿酒酵母相似的分子及遗传操作优点,且它的外源蛋白表达水平是后者的十倍以至百倍,这使得毕赤酵母成为非常有用的蛋白表达系统。
中国药典 2020 版三部规定,以细胞基质生产的生物制剂 DNA 残留量不能超过 100 pg/剂,以细菌或真菌基质(酵母、大肠杆菌等)表达的生物制品中 DNA 残留量不超过 10 ng/剂。
试剂盒可与abs60544宿主细胞残留 DNA(磁珠法)样本前处理试剂盒配套使用。(宿主细胞残留 DNA(磁珠法)样本前处理试剂盒配套使用时,提取时勿加酵母 tRNA。)
建议所有使用该试剂盒的实验室按需可做以下验证:标准品线性、 样本线性、 准确度(加标回收率)、定量限、精密度(重复性)、 分析特异性以及阴性参考品符合率。
样本线性:依据 YY/T 1182-2020 的相关要求,在线性范围内,取接近线性范围上限的高值样本按一定比例(如 5 倍或 10 倍)稀释为至少 5 种浓度,其中低值浓度样本须接近线性范围的下限,将每一浓度样本检测 1 次或多次,计算每一浓度的对数均值和稀释比例(或理论浓度)的对数值,以浓度的对数均值为 Y,稀释比例(或理论浓度)的对数值为 X 进行线性拟合,计算其线性相关系数 r。
分析特异性验证:验证需避免工艺杂质对检测结果的干扰,必要时可对样本进行核酸提取纯化。为避免基质干扰和保证检测有效性建议使用纯度较高的 DNA 进行相应稀释后来做验证。
精密度/定量限:验证时,如需同时配制标曲,需控制 CV,避免重复操作过多,CV 偏大影响标曲建立和精密度/定量限验证。
数据分析:由于仪器不同,数据阈值线会存在区别,故在数据分析时需依据实际情况统一阈值线再进行数据分析比较。
样本核酸提取纯化:可与“宿主细胞残留 DNA(磁珠法)样本前处理试剂盒”配合使用。该试剂盒主要用于生物制品样本中微量核酸的提取,可精准抽提各种生物制品中宿主细胞残留 DNA,适 用于多种基质缓冲溶液,可有效提取纯化微量的 DNA。
产品性能指标:
线性范围:300pg/µL-0.03pg/µL;
标准品线性:R2≥0.980,扩增效率 90%≤Eff(%)≤110%,各浓度检测值 CV<15%。
准确度(加标回收率):70%-130%。
定量限:0.01pg/µL,CV≤20%,测量偏差不大于|±20%|。
精密度(重复性):高、中两个浓度参考品各 10次,变异系数CV<15%。
分析特异性:考察生物制品生产中常用的 DNA 对检测试剂盒的干扰,干扰组应与对照组重合,未见干扰。
阴性参考品符合率:NTC 为 Undetermined 或 Ct 值>35。
适用机型(包括但不限于):ABI QuantStudio 3,ABI 7500 等。
冻融稳定性:5 次以上。
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2、阴性样品(2×qPCR Reaction MIX、Primer&Probe MIX 和 DNA稀释液等)和阳性样品(参考品和待测样品等)的配制和加样环境需区分区域,不可在一个区域内操作,配制人员需穿戴整齐,戴好口罩、手套和穿好洁净服。
3、注意在不同加样步骤间及时更换吸头,避免交叉污染,避免长时开盖,使用移液器移液时,需避免液体挂壁。
4、试剂盒必须在有效期内使用,每次实验均需重新制备相应的标准曲线,不建议不同标准曲线之间混用,不建议不同批次的相关试剂混用。
5、试剂盒内所有组分建议在低温环境融化后使用,且需确保其充分溶解,各组分使用前需充分混匀,以保证试剂的均一性,经混匀的试剂需经短暂离心,以使管壁及盖子上的液体全部集中于管底。若发现DNA 稀释液中有析出物,建议于 37 ℃条件下进行孵育,使 DNA 稀释液完全溶解。
6、只有严格遵守说明书的操作方法,全部使用本试剂盒配套的试剂才能保证最佳检测效果。
7、最终的试验结果与试剂的有效性、操作者的操作方法及试验环境密切相关。
8、公司只对试剂盒本身负责,不对因使用该试剂盒所造成的样本消耗负责,请使用者使用前充分考虑到样本的可能使用量,预留充足的样本。
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