质粒DNA残留(qPCR)检测试剂盒

病毒包装系统制备病毒颗粒，为了增加病毒的安全性能，病毒制备所必需的元件序列被拆分到不同的质粒当中，而这些质粒会作为外源DNA残留在产品中。2022年5月份CDE 颁布的《体内基因治疗产品药学研究与评价技术指导原则》就明确指出AAV等易于将非载体DNA包装入病毒颗粒的病毒载体，在选择包装质粒时应考虑相关外源 DNA包装入病毒颗粒的潜在风险。
        质粒DNA残留（qPCR）检测试剂盒，通过对市场所用质粒共有DNA序列的分析，可以实现定量检测样品（如慢病毒、腺病毒等）中各类质粒DNA的残留，本试剂盒检测专一性强，灵敏度高，性能可靠，配套宿主细胞残留DNA样本前处理试剂盒使用，可准确定量样品中残留的微量质粒DNA。
        建议所有使用该试剂盒的实验室按需可做以下验证：标准品线性、 样本线性、 准确度（加标回收率）、定量限、精密度(重复性)、 分析特异性以及阴性参考品符合率。
        样本线性：依据 YY/T 1182-2020 的相关要求，在线性范围内，取接近线性范围上限的高值样本按一定比例（如 5 倍或 10 倍）稀释为至少 5 种浓度，其中低值浓度样本须接近线性范围的下限，将每一浓度样本检测 1 次或多次，计算每一浓度的对数均值和稀释比例（或理论浓度）的对数值，以浓度的对数均值为 Y，稀释比例（或理论浓度）的对数值为 X 进行线性拟合，计算其线性相关系数 r。
        分析特异性验证：验证需避免工艺杂质对检测结果的干扰，必要时可对样本进行核酸提取纯化。为避免基质干扰和保证检测有效性建议使用纯度较高的 DNA 进行相应稀释后来做验证。
       重复性/定量限：验证时，如需同时配制标曲，需控制 CV，避免重复操作过多，CV 偏大影响标曲建立和重复性/定量限验证，具体可参考爱必信咨询相关技术支持。
        数据分析：由于仪器不同，数据阈值线会存在区别，故在分析数据时需依据实际情况统一阈值线。
        样本核酸提取纯化：可与爱必信的“宿主细胞残留 DNA（磁珠法） 样本前处理试剂盒”配合使用。该试剂盒主要用于生物制品样本中微量核酸的提取，可精准抽提各种生物制品中宿主细胞残留 DNA， 适用于多种基质缓冲溶液，可有效提取纯化微量的 DNA。
产品特点：
精密度高：低浓度重复性CV值<20%；中高浓度重复性CV值<15%
快速高效：检测快速，一小时即可出结果
灵敏度高：定量限为40 copies/μL
产品性能指标：
检测范围：线性化 4×10⁶ copies/µL~4×10¹ copies/µL；非线性化 2×10⁶ copies/µL~2×10² copies/µL。
标准品线性：R 2≥0.980，扩增效率 90%≤Eff（%）≤110%，各浓度检测值 CV<15%。
准确度（加标回收率）：70%-130%。
线性化定量限：4×10¹ copies/µL，非线性化定量限：2×10² copies/µL， CV≤20%，测量偏差不大于|±20%|。
精密度(重复性)：高、中两个浓度参考品各 10次，变异系数CV<15%。
分析特异性：考察生物制品生产中常用的 DNA 对检测试剂盒的干扰，干扰组应与对照组重合，未见干扰。阴性参考品符合率：比标准曲线最低点高 2~3 个 Ct 值。
适用机型（包括但不限于）：ABI QuantStudio 3，ABI 7500，Bio-RadCFX Opus96 等。
冻融稳定性：5 次以上。

1、本试剂盒已通过稳定性（冻融等因素）的验证，无需分装。 
2、阴性样品（2×qPCR Reaction MIX、Primer&Probe MIX 和 DNA稀释液等）和阳性样品（参考品和待测样品等）的配制和加样环境需区分区域，不可在一个区域内操作，配制人员需穿戴整齐，戴好口罩、手套和穿好洁净服。 
3、注意在不同加样步骤间及时更换吸头，避免交叉污染，避免长时开盖，使用移液器移液时，需避免液体挂壁。 
4、试剂盒必须在有效期内使用，每次实验均需重新制备相应的标准曲线，不建议不同标准曲线之间混用，不建议不同批次的相关试剂混用。 
5、试剂盒内所有组分建议在低温环境融化后使用，且需确保其充分溶解，各组分使用前需充分混匀，以保证试剂的均一性，经混匀的试剂需经短暂离心，以使管壁及盖子上的液体全部集中于管底。若发现DNA 稀释液中有析出物，建议于 37 ℃条件下进行孵育，使 DNA 稀释液完全溶解。 
6、只有严格遵守说明书的操作方法，全部使用本试剂盒配套的试剂才能保证最佳检测效果。 
7、最终的试验结果与试剂的有效性、操作者的操作方法及试验环境密切相关。 
8、公司只对试剂盒本身负责，不对因使用该试剂盒所造成的样本消耗负责，请使用者使用前充分考虑到样本的可能使用量，预留充足的样本。