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25 mL 镍结合树脂(最大压力:140 psi)
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Features
- 卓越的机械稳定性、出色的流动特性和高动态结合能力
- 方便的一步 6xHis 标签蛋白纯化
- 允许高流速和高压力,适用于高效的生产规模和 FPLC 应用
Product Details
Ni-NTA Superflow 是一种亲和层析基质,用于纯化带有 His 标签的重组蛋白。
His 标签中的组氨酸残基凭借高特异性和亲和力,与固定镍离子配位球中的空位结合。澄清的细胞裂解物被加载到基质上。His 标签蛋白与基质结合,其他蛋白则穿过基质。洗涤后,在非变性或变性条件下在缓冲液中洗脱 His 标签蛋白。
Performance
Ni-NTA Superflow 由 Ni-NTA 与 Superflow 树脂偶联而成。此产品集卓越的机械稳定性、出色的流动特性和高动态结合能力于一身。6xHis 标签蛋白的含量为 5–10 mg/mL。此树脂可使用高流速和高压力一步纯化 6xHis 标签蛋白,适用于高效的生产规模和 FPLC 应用。
Principle
QIAexpress Ni-NTA 蛋白纯化系统基于获得专利的 Ni-NTA(次氮基三乙酸镍)树脂对含有六个或更多组氨酸残基的亲和标记(His 标记)的蛋白的显著选择性。该技术可在非变性或变性条件下,从任何表达系统中一步纯化几乎所有 His 标签蛋白。
NTA 有四个镍离子螯合位点,与只有三个位点可与金属离子相互作用的金属螯合纯化系统相比,NTA 与镍的结合更紧密。额外的螯合位点可防止镍离子浸出,与其他金属螯合纯化系统相比,它的结合能力更强,制备的蛋白纯度更高。Ni-NTA Superflow 可用于从任何表达系统中纯化 His 标签蛋白,包括杆状病毒、哺乳动物细胞、酵母和细菌。
Procedure
His 标签蛋白的纯化分为 4 个阶段:细胞裂解、结合、洗涤和洗脱。使用 Ni-NTA Superflow 纯化重组蛋白与蛋白或 6xHis 标记的三维结构无关。这样就可以在非变性或变性条件下,从稀释溶液和粗裂解物中一步纯化蛋白。
强变性剂和洗涤剂可用于高效溶解和纯化受体、膜蛋白和形成包涵体的蛋白。洗涤缓冲液中可加入能高效去除非特异性结合污染物的试剂(见表)。
通过添加 100–250 mM 咪唑作为竞争剂或降低 pH 值,在温和条件下洗脱纯化的蛋白。
Applications
Ni-NTA 基质能可靠地一步纯化适用于任何应用的 His 标签蛋白,其中包括:
- 结构和功能研究
- 结晶以确定三维结构
- 蛋白间和蛋白与 DNA 之间相互作用检测
- 通过免疫接种产生抗体
- 将纯化规模扩大到生产规模
N对于 Ni-NTA Superflow,药物主文件 (DMF) 包含产品特性、色谱参数、化学和物理信息、质量控制规范、安全性和毒性