QIAseq 1-Step Amplicon Library Kit (12)

Performance

文库DNA产量高，位点覆盖全面

GeneRead Library Prep Kits的工作流程经过优化，十分高效，能够稳定获得高产量DNA文库，序列偏差小，错配率低；文库适合用于Illumina或Life Technologies的Ion Torrent NGS平台。高效的连接反应和可选的高保真扩增步骤能够确保从少量起始材料、甚至是50 ng起始材料中获得高产量文库，且位点覆盖全面（参见High yields of library DNA with uniform coverage distribution和Superior yields of library DNA）。

错配率低，序列偏差小

为确保从少量起始材料中获得最大产量，GeneRead Library Prep Kits含有创新的高保真预混液，其中含有用于扩增的GeneRead HiFi Polymerase。GeneRead HiFi Polymerase是独特的、高度特异性的进行性聚合酶，能够准确扩增文库DNA，错配率低，序列偏差小（参见Low error rates with minimal sequence bias due to high-fidelity amplification）。

扩增富含GC和AT的序列时，序列偏差较小

在标准PCR扩增中，AT或GC含量高的DNA序列扩增产物可能较少或没有，导致错误的序列数据或NGS测序结果。GeneRead HiFi Polymerase与预混液中独特的配方共同作用，能够确保均一扩增GC含量高的基因组序列，确保在后续的测序实验中获得准确结果（参见Better sequence coverage）。

Principle

GeneRead Library Prep Kits的单管式工作流程经过优化，能够稳定获得高产量DNA文库；文库适合用于Illumina或Life Technologies的Ion Torrent NGS平台。与其他供应商的文库制备工作流程相比，快速的单管式实验流程采取较少的回收步骤，且包含可选的高保真文库扩增步骤。GeneRead Library Prep Kits极大程度减少了手工操作可能带来的污染和失误风险，节省时间和人力（参见Optimized workflow for Illumina-compatible DNA libraries和Optimized workflow for Ion Torrent-compatible DNA libraries）。

Procedure

制备适用于Illumina平台的DNA文库的实验流程

由长片段DNA组成的样本首先被剪切为300 bp（使用Illumina MiSeq仪器，version 1）或500 bp（使用Illumina MiSeq仪器，version 2）的中等长度片段的随机文库。剪切后，修复DNA片段两端，在每条链的3'端加上Poly A尾巴。之后，将扩增和测序所必须的接头连接到DNA片段两端。GeneRead Library Prep (I) Kit中含有的Barcode接头含有独特的辨别序列，因此能够进行多重测序反应。之后选择一定长度的片段进行纯化。可使用GeneRead Size Selection Kit（货号180514）进行准确的片段回收和片段长度选择（参见Precise size selection）。为确保从少量起始材料中获得高产量，可选择性进行高保真扩增步骤。

制备适用于Ion Torrent平台的DNA文库的实验流程

由长片段DNA组成的样本首先被剪切为400 bp（使用Ion Torrent PGM仪器）或200 bp（使用Ion Proton仪器）的中等长度片段的随机文库。剪切后，修复DNA片段两端。之后，将扩增和测序所必须的接头连接到DNA片段两端。GeneRead Library Prep (L) Kit中含有的Barcode接头含有独特的辨别序列，因此能够进行多重测序反应。之后选择一定长度的片段进行纯化。为确保从少量起始材料中获得高产量，可选择性进行高保真扩增步骤。

Applications

GeneRead Library Prep Kits能够快速、高效的制备DNA文库，制备的文库可用于Illumina或Life Technologies的Ion Torrent NGS平台。