REPLI-g Single Cell Kit (96)

• 采用多重置换扩增技术对基因组位点进行无偏差的扩增
• 适用于二代测序等新技术应用
• 产量稳定，可达40 µg（产物平均长度大于>10 kb）
• 可用于癌症、干细胞或宏观基因组学（metagenomics）研究

很多研究人员使用二代测序仪器对生物样本的DNA序列进行分析和基因分型，但经常受限于有限的样本量。REPLI-g Single Cell Kit可均一的扩增单个细胞（1至1000个细菌或肿瘤细胞）或纯化的基因组DNA，能够覆盖基因组所有位点。另有专用于干血或新鲜或冷冻的组织样本的实验方案。所有缓冲液和试剂生产都经过严格控制的流程，避免污染DNA，确保每次实验获得可靠的结果。该产品采用多重置换扩增（MDA）技术，对所有基因组位点进行无偏差的扩增。与基于PCR的全基因组扩增技术相比，该技术具有更好的扩增高保真度，避免出现假阳性或假阴性信号。

REPLI-g Single Cell Kit含有REPLI-g sc Polymerase，这是一种优化的新型高保真Phi 29聚合酶。该试剂盒采用多重置换扩增技术扩增复杂的基因组DNA，温和的碱孵育能够避免DNA片段化，促进对所有位点的无偏差扩增。该试剂盒十分适用于分离的肿瘤细胞或细菌细胞等单一细胞，能够扩增获得高产量DNA（参见表1）。此外，该试剂盒还配有专用于鲜血或干血、新鲜或冷冻组织的实验方案，可用于多种研究样本。常规DNA产量可达40 µg，对模板的起始量要求低，因此进行后续遗传分析时无需检测DNA浓度。REPLI-g Single Cell Kit的扩增产物平均长度超过10 kb，且覆盖所有位点，适合于多种应用，包括二代测序、基于芯片技术的比较基因组杂交、焦磷酸测序和real-time PCR分析（参见表2）。

扩增原理

REPLI-g Single Cell Kit采用等温基因组扩增技术，即多重置换扩增（MDA）。六聚体与变性DNA随机结合，然后在等温条件下，在优化的Phi 29聚合酶作用下，发生链置换合成反应。每个置换后的单链作为模板，与引物结合，可扩增获得高产量DNA（参见" Multiple Displacement Amplification (MDA) technology"）。Phi 29聚合酶为噬菌体衍生酶，具有3'→5'引物外切酶活性（校正活性），其保真性是Taq DNA聚合酶的1000倍。Phi 29聚合酶在优化的REPLI-g Single Cell缓冲液体系中，能够轻松的打开发卡结构等二级结构，因此可促进扩增时聚合酶正常工作。可扩增获得长达100 kb的DNA片段（参见" Unbiased amplification with Phi 29 polymerase"）。

细胞裂解和DNA的碱变性 

基因组DNA在用于酶促扩增反应前必须经过变性，而这一变性过程通常使用高温或高pH值（强碱）孵育。REPLI-g Single Cell Kit采用温和的碱孵育，在细胞裂解、DNA变性的同时，确保DNA片段化程度小，不产生碱基突变。因此扩增获得的DNA完整度高，产物长度长，覆盖位点多（参见" Effect of heat and alkaline denaturation on loci representation"）。

高效去除可检测到的DNA污染

REPLI-g Single Cell Kit中的所有组分都经过了独特的去污染流程，避免扩增产物被污染。在标准化流程中，对缓冲液和试剂进行紫外线照射，确保其不会污染DNA（参见" Innovative decontamination procedure"）。紫外线照射后，对试剂盒的所有组分进行严格的质量控制，确保其性能。

简单的单管操作

REPLI-g Single Cell Kit可对单一细胞或有限的样本进行简便、可靠、准确的全基因组扩增。反应体系构建十分便利、可靠，仅需15分钟左右的手动操作（参见" REPLI-g Single Cell Kit procedure"）。专用的缓冲液和试剂可对单一细胞、有限的组织材料、或纯化的DNA进行扩增，产量高、位点覆盖率大（参见表3）。REPLI-g技术扩增获得的DNA可在–20°C长期储存（参见" Consistent long-term stability"）。请参见表4，了解REPLI-g产品线的更多信息。