树突状细胞(也称DC细胞)是由加拿大学者Steinman于1973年发现的,是功能最强的抗原提呈细胞,因其成熟时伸出许多树突样或伪足样突起而得名。
DC广泛分布于皮肤、气道、淋巴器官等部位,具有高度异质性,故不同组织中的DC有不同的名称。例如分布于皮肤表皮基底层和棘细胞之间的DC称为朗格汉斯细胞。
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树突细胞(DC)来自造血干细胞并发育成与其他白细胞不同的离散细胞谱系。在人外周血(PB)中主要描述了三种表型和功能不同的DC亚群:表达关键标记CD303(BDCA-2)的浆细胞样DC(pDC)和两种髓样DC亚群(CD1c+ DC(mDC1)和CD141+ DC(mDC2)),分别表达关键标记CD1c(BDCA-1)和CD141(BDCA-3)。
除了这些原代细胞亚群外,DC还可以在Flt3配体或CD14+单核细胞(单核细胞衍生的DCs(mo-DC))存在下从CD34+ 干/祖细胞体外产生。存在粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子+白细胞介素-4。
在这里,我们比较HLDA10抗体(单克隆抗体(mAb))与pDC,CD1c + DCs和CD141 + DCs的反应性模式,以及在100ng/ml GM-CSF加20ng/ml IL-4存在下培养7天的CD14 +衍生的mo-DCs的反应性模式。
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门控策略,用于在用指定的Abs染色PBMC后鉴定pDC,CD1c+ DC和CD141+ DC。在FACSCanto II流式细胞仪(Heidelberg,Germany)上分析五十万个染色的PBMC,并使用FlowJo软件进行连续门控分析。
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DC亚群被鉴定为以下三群:
pDC:lin-(CD3,CD19,CD56)CD14- CD11cdim HLA-DR+ CD1c- CD303+;
CD1c+ DCs:lin-(CD3,CD19,CD56)CD14- CD11c+ HLA-DR+ CD1c+ CD303-;
CD141+ DCs:lin-(CD3,CD19,CD56)CD14- CD11c+ HLA-DR+ CD1c- CD303-CD141+。
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染色的PBMC分别用于证明所选Abs与pDC,CD1c + DC和CD141 + DC的反应性。图显示特定HDLA-10 Ab染色(实线)和对照染色(虚线)的直方图叠加。注意,Ab 10-45识别CD141+ DC但不识别其他DC子集,并且Ab 10-55,10-69和W4A5显示异质反应性模式。
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用CD209-APC和研讨会Abs染色mo-DC。在FACSCanto II流式细胞仪上分析了数十万个染色的细胞,并使用FlowJo软件进行门控(P1 + P3)。CD209用作鉴定培养的DC的关键标记。
Reference:Profiling of primary peripheral blood- and monocyte-derived dendritic cells using monoclonal antibodies from the HLDA10 Workshop in Wollongong,Australia
doi:10.1038/cti.2015.29