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流式应用文献分享#5:在体内开发T辅助细胞和Treg细胞的方案

辅助性T细胞是一种T细胞(白细胞的一种),它的表面有抗原接受器,可以辨识抗原呈献细胞的MHC Class II 分子呈献的抗原片段。

辅助T细胞(helper T cell)在免疫反应中扮演中间过程的角色:它可以通过增生扩散来激活其它类型的产生直接免疫反应的免疫细胞。辅助T细胞的主要表面标志是CD4。

 

辅助性T 细胞17(T helper cell 17, Th17)是一种新发现的能够分泌白介素17(interleukin 17, IL-17)的T 细胞亚群,在自身免疫性疾病和机体防御反应中具有重要的意义。β转化生长因子(TGF-β)、IL-6、IL-23和IL-21在Th17 细胞的分化形成过程中起着积极的促进作用,而γ干扰素 (IFN-γ)、IL-4、细胞因子信号传送阻抑蛋白3(Socs3)和IL-2则抑制它的分化。

 

调节性T细胞(Regulatory cells,简称Tregs )是一类控制体内自身免疫反应性的T细胞亚群,早期亦称做suppressor T cells。调节性T细胞可分为天然产生的自然调节性T细胞(n T-regs)和诱导产生的适应性调节性T细胞(a T-regs或i T-regs),如Th3、Tr1,另外尚有CD8 Treg、NKT细胞等,与自身免疫性疾病的发生关系密切,其异常表达可导致自身免疫性疾病。其中Tr1细胞分泌IL-10;Th3细胞分泌TGF-β。

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实验WorkFlow

结肠炎模型中Th1,Th17和Treg细胞发育

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实验结果图

实验准备:腹膜内注射C57BL/6Rag1-/-小鼠。用来自C57BL/6IL-17Agfp供体的0.4×106天然CD4 CD45RBhigh T细胞。在不同的指定时间(2-8周)处死小鼠。

 

a:来自所示实验组的近端结肠切片的代表性图(200x放大倍数,比例尺,50μM)

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b:显示结肠炎评分

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c:体重曲线

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d:IL-17A CD4 T细胞的频率

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e:转录因子RORγt

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f:IFN-γCD4T细胞

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细胞因子检测注意事项:

IFN-γ、IL-17A等是胞内因子,所以在流式检测中必不可少的产品就是刺激剂与固定破膜剂,例如BD Pharmingen™的Cat.No.555899和Cat.No.554714刚好可以做到。

 

g:T-bet

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h:Foxp3 CD4 T细胞

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核内转录因子检测注意事项:

Foxp3、T-bet、RORγt等是核内转录因子,所以在流式实验中必不可少的步骤就是固定破膜,用而于检测核内转录因子的固定破膜剂要选择可以破核膜的固定破膜剂,例如BD Pharmingen™的一款产品Cat.No.562574正好可以满足此需求。

 

i:在CD4 T细胞中的Neuropilin-1+和Helios+ CD4+ T细胞来自受体小鼠的肠系膜淋巴结(MLN)和结肠固有层(LP)。两个分开实验,每组由五只小鼠组成。

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Reference:A protocol to develop T helper and Treg cells in vivo

doi:10.1038/cmi.2017.116

 

  • 解决方案图片 解决方案 T cell solution

    根据功能,T细胞可以分为三群:细胞毒性T细胞、辅助性T细胞(Th)和调节T细胞(Tregs)。不同细胞表达的抗原标记物和分泌的细胞因子的差异,为研究T细胞多样化的性质和功能提供了有价值的线索。

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