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TIL细胞是一种淋巴细胞称为肿瘤浸润淋巴细胞（TIL），它是一种新型的抗肿瘤效应细胞，具有高效、特异、副作用小等优点。
浸润肿瘤的CD8 + T细胞很大程度上是功能失调的，但是一个子集是否保持优越的功能仍然是不明确的。通过对来自53位患有肺癌的个体的数百万CD8 + T细胞的高维单细胞分析，我们定义了与无癌组织和血液相比富含肿瘤的那些亚组。除了耗尽和活化的细胞，我们鉴定了具有部分耗尽表型的CXCR5 + TIM-3- CD8 + T细胞，同时保留了负责干细胞可塑性和细胞毒性的基因网络，如通过整个转录组的单细胞测序所揭示的。与更多分化的亚群相比，离体，CXCR5 + TIM-3- CD8 + T细胞显示出增强的自我更新和多能性，并且主要是多功能的。抑制和共刺激受体的分析显示PD-1，TIGIT和CD27作为免疫疗法的可能靶标。因此，我们证明了在人类癌症的T细胞耗竭的背景下的分化等级，类似于慢性感染的小鼠，其进一步显示随着疾病进展而消失。
实验WorkFlow
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注意Tips
一、样本制备
在本次实验中，作者使用了三种来源的样本，分别是：肿瘤组织、外周血和正常肺脏组织。
外周血和肺脏组织是相对于容易处理的样本，而肿瘤样本本身的异质性&死细胞增加了处理难度。如何在处理完后保证高纯度、高得率和高活性呢？
不得不提我们的两款经典产品：
| 产品名称 | 货号 | 规格 |
| Tumor Dissociation Kit，mouse 肿瘤解离试剂盒 |
130-095-929 | for 25T |
| gentleMACSTM Octo Dissociator with Heaters 全自动组织处理器 |
130-096-427 | for 25T |
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二、多色配色Panel的完整性
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指标：CD69、CXCR5、TIM-3、Ki67、CD27、CD28、PDCD1、TIGIT、LAG3、CTLA4、CD8、TCF-1、Eomes、T-bet、PD-1、CXCR3、TNF、IL-2、IFN-γ、CD107a、CD45RA、CD25、HLA-DR...25色，27个参数
BD FACSymphony™ system最高可以达到50色分析
可供选择的荧光素有：
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三、流式数据分析结果的输出形式
在本文中，并未看到以往常见的散点图或者密度图，取而代之的是一系列高能图，包括T-SNE、棋盘图和热图。
第一个：T-SNE降维分析
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我们可以从图中得到在三种不同样本各群落的表达情况与未知群落的发现。是不是非常直观了呢？
第二个：热图分析
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第三个：棋盘图
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从上面两图中可以得到不同样本中同一指标的表达情况和同一样本中不同指标的表达情况
怎样得到像文中一样“炫酷”的流式图呢，就是借用了最快的东风：
流式分析软件“大当家”------Flowjo V10.6
Flowjo是20世纪90年代由斯坦佛大学专家Mario Roederer等开发。从最初的V1版本到现在的V10版本，经历了和Windows一样长的发展历史。在顶尖免疫学杂志的使用率高达97%。而最新的版本V10.6更是添加了非常丰富的插件功能：https://www.flowjo.com/exchange/#/ （进入网站链接可以查询更多详情）
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这么多插件功能，您都解锁了吗？
