HTRF®和AlphaLISA®技术在细胞因子检测中的应用

细胞因子在炎症过程中发挥重要作用，导致它们参与病毒和细菌感染，以及许多疾病的病理学，包括 癌症、自身免疫疾病、神经退行性疾病、动脉粥样硬化以及现下火热的细胞治疗引起的细胞因子风暴。因此，细胞因子经常被直接或间接地用作开发新的免疫调节疗法的药物发现靶点。

 

细胞因子是免疫系统细胞之间，以及免疫系统细胞与其他类型细胞间联络的核心，能改变分泌细胞自身或其他细胞的行为或性质，通过与细胞特异的膜受体而起作用。其 主要生物学作用有：

 

1.抗感染、抗肿瘤作用，如IFN、TNF等；

 

2.免疫调节作用，如IL-1、IL-2、IL-5、IFN等；

 

3.刺激造血细胞增殖分化，如M-CSF、G-CSF、IL-3等；

 

4.参与和调节炎症反应，如：IL-1、IL-6、TNF等。

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细胞因子共分六类：白细胞介素、干扰素、肿瘤坏死因子、集落刺激因子、生长因子和趋化因子。

 

白细胞介素或白介素（interleukin，IL）是一组在白细胞或免疫细胞之间相互作用的细胞因子。最早发现在白细胞中表达，作为细胞间信号传递的手段。白细胞介素可以由多种细胞产生，免疫系统的功能在很大程度上依赖于白细胞介素。一些罕见的白细胞介素缺陷不足都常出现自身免疫性疾病或免疫缺陷。

 

干扰素（Interferon，IFN）是动物细胞受多种因素诱导（如病毒）后分泌的具有抗病毒、抑制细胞增殖、调节免疫及抗肿瘤等作用宿主特异性蛋白质。干扰素是一类糖蛋白具有高度的种属特异性。人体IFN根据细胞来源分为3种类型：白细胞产生的为α型；成纤维细胞产生的为β型；T细胞产生的为γ型。根据干扰素的产生细胞、受体和活性等综合因素将其分为2种类型：Ⅰ型和Ⅱ型。Ⅰ型干扰素又称为抗病毒干扰素以抗病毒为主。人体内Ⅰ型干扰素有2种形式：IFNα、IFNβ，它们分别由白细胞、纤维母细胞产生。Ⅱ型干扰素又称免疫干扰素或γ-干扰素，主要由T细胞产生参与免疫调节，是体内重要的免疫调节因子。

 

肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor，TNF）是一类能引起肿瘤组织出血坏死的细胞因子。根据来源和结构分为两种类型，TNF-α和TNF-β两种因子，均有抗肿瘤作用，也是重要的致炎因子和免疫调节因子。TNF-α主要由单核巨噬细胞分泌；TNF-β主要由活化的T淋巴细胞分泌，又称淋巴毒素。TNF在体内外均能刺激IL-1的产生。

 

细胞因子与肿瘤免疫

现有的研究表明，胃癌、非小细胞肺癌、黑色素瘤、淋巴瘤、直肠癌、骨肉瘤、卵巢癌、鼻咽癌等多种肿瘤与Th2漂移有密切关系，且与肿瘤的恶性程度呈正相关。

 

细胞因子与血液病

在CAR-T治疗中，细胞因子可作为细胞因子释放综合征(CRS)的伴随诊断：推荐IL-6、TNF-α、IFN-γ 作为CAR-T治疗期间的常规监测指标者容易复发耐药，预后不良。IL-6和IL-10可由肿瘤细胞自身所分泌，其高表达的弥漫大B细胞淋巴瘤患及淋巴瘤等肿瘤细胞对化疗药物产生耐药性。

 

细胞因子与移植排斥

细胞因子经常在免疫排斥反应的初期，甚至起始阶段即可出现明显变化。研究表明，排斥反应过程常伴有Th1型细胞因子的高表达及Th2型细胞因子的低表达或不表达，在免疫耐受过程中则相反。有研究显示，IL-12p70对肾脏术后急性排斥反应的预测价值最大。

 

细胞因子与自身免疫性疾病 

I型糖尿病、多发性硬化、类风湿性关节炎及慢性甲状腺炎等疾病中，Th1细胞因子占优势，这可能与细胞免疫的激活有关。

硬皮病、系统性红斑狼疮以及HIV感染，Th2则占优势。对于某些器官特异性自身免疫性疾病来说，Th1可诱导发病，并加重病情；Th2则能减轻病症，甚至能阻止发病，与Th1/Th2的炎性及抗炎性反应有关。

 

细胞因子与代谢性疾病

有研究表明，在糖尿病患者中，当血清中IL-6、IL-10、TNF-α水平升高时，提示患者有并发高血压的风险。IL-6、TNF-α是导致糖尿病的重要因素，参与了糖尿病及其所引起的血管并发症的整个过程。

随着对细胞因子-受体相互作用的结构原理和功能信号的深入了解，通过蛋白质工程等方法对细胞因子进行人工修饰使得细胞因子成为药物越来越变的可能。近日中科院的研究者在Nature上发表综述性文章，对细胞因子类药物的研究进展进行了全面的介绍。

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Nature Reviews Clinical Oncology近期也有关于细胞因子进行治疗肿瘤的综述。

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HTRF®和AlphaLISA®技术试剂盒涵盖了各种细胞因子：白细胞介素、干扰素(IFN)、肿瘤坏死因子和趋化因子。我们所有的检测试剂盒都可以检测细胞上清液中细胞因子的释放。已经在几种细胞系、原代细胞和PBMCs中得到验证。

 

对于肿瘤学、NASH、免疫耐受、炎症疾病或任何其他炎症过程的研究人员来说，HTRF®和AlphaLISA®技术细胞因子检测试剂盒成为ELISA或其他检测方法的快速替代品。

 

HTRF®和AlphaLISA®技术优势有哪些

1.均相体系，操作方便、无洗涤步骤、2h完成检测；

 

2.节省样本，样本需求低至5μl；

 

3.体系稳定，批次间重复性高；

 

4.灵敏度高，实验窗口大，线性范围宽；

 

5.高通量，兼容96/384/1536孔板。

 

 

HTRF®检测原理及流程

HTRF®细胞因子采用 夹心分析法检测，使用两种不同的特异性抗体，一种用 Eu（供体）标记，另一种用 d2（受体）标记。当标记的抗体与同一抗原结合时，供体用光源（激光或闪光灯）激发，触发向受体的荧光共振能量转移(FRET)，进而在特定波长(665nm)发出荧光。这两种抗体与样本中存在的T细胞因子结合，从而产生FRET。信号强度与形成的抗原-抗体复合物的数量成正比，因此也与检测的细胞因子浓度成正比。

 

实验仅需在空板中加入16μl检测样本，然后加入4μl检测抗体孵育2小时后即可使用酶标仪进行读数。

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部分细胞因子检测试剂盒结果如下: