哈喽,大家,我是你们的小优,今天这篇文章拿出来,主要是因为有些学校客户咨询,不知道大家有没有这样的疑问?
用动物组织样本做ELISA时实验,如何确定排除检测误差?它与western blot定量哪个实验结果更可靠?
优宁维技术解析:
①关于实验选择
定量检测的话肯定是选ELISA。Western blot只是一个半定量的实验方法。
②关于排除检测误差
1. 实验人员一定要选好合适的内参,比如可以测目标蛋白/总蛋白,则内参是总蛋白量,如果使用目标蛋白/总组织重量,则很不准确,因为抽提过程的效率不稳定,即每克组织能够提取出来的蛋白量不固定,而且每个组织含水/含不相干的组织量也不同。建议可以参考相关文献来选择内参。
2. 最普通的查验误差的办法,每个试样多测几个孔。一般至少两个,三个更好。确定每个孔读数一致或非常相近,则知道结果比较可信。
③组织样本的处理原则
1. 称取的组织重量不能低于50mg。
2. 匀浆的比例按照10%,即1g组织加9ml的匀浆液,匀浆液一般选取PBS(PH=7.2-7.4)
3. 组织在匀浆器匀浆过程中,匀浆液应该分2次加进去,这样匀浆更充分。
4. 充分匀浆完成后离心取上清,离心机的转数选取2000-3000转每分,转数不宜超过5000.离心时间为15-30分钟!