巨噬细胞是造血系统中最具可塑性的细胞,存在于所有组织中,并显示出巨大的功能多样性。它们在发育、体内平衡、组织修复和免疫中发挥作用。目前,巨噬细胞已经成为许多人类疾病的重要治疗靶点,所以认识到巨噬细胞的多样性是至关重要的。
组织驻留巨噬细胞是在大多数器官中发现的一个多样化的细胞家族,如大脑小胶质细胞、肝脏Kupffer细胞和肺泡巨噬细胞。对于各脏器中的巨噬细胞的研究,人的样本很难获取,因此小鼠模型就是最佳的研究对象。在小鼠各脏器中巨噬细胞的异质性,导致在做免疫相关的流式研究时,选择的标志物或染色结果图会出现差异。
下面给大家介绍一些小鼠不同研究样本中的巨噬细胞标志物及图例。
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1. 小鼠血液
在小鼠血液中,巨噬细胞也可以叫做Ly-6Clow单核细胞,含量较少,一般用CD11b+、F4/80+作为检测标志物。
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2. 小鼠骨髓
巨噬细胞也一般用CD11b+、F4/80+作为检测标志物。
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3. 小鼠肝脏组织
小鼠肝脏中有两类巨噬细胞,一类叫做kupffer细胞,用F4/80 hi CD11b low进行鉴定。另一类叫单核细胞衍生的巨噬细胞,用F4/80 low CD11b hi进行鉴定。
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4. 小鼠肺组织
小鼠肺中也有两类巨噬细胞,分为肺泡巨噬细胞(Alveolar macrophages)和肺间质巨噬细胞(Interstitial macrophages),可以用CD64+MerTK+圈出肺巨噬细胞,再通过CD11b和CD11c区分肺泡和肺间质巨噬细胞,且有利于在一个panel中同时做巨噬和DC的区分(不做详细划分巨噬细胞类型,也可用CD11b和F4/80marker检测)。后面还可以增加,CD11C,CD206和MHCⅡ做进一步分型。
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图例1
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5. 小鼠中枢神经系统
小鼠中枢神经系统存在多种巨噬细胞,有小(神经)胶质细胞(CD11b+CD45lowF4/80+)和单核细胞衍生的巨噬细胞(CD11b+CD45hi)。
单核细胞衍生的巨噬细胞继续细分的话,包括:
血管周围巨噬细胞(CD11b+CD45hiF4/80+CD163+CD206+)
脑膜巨噬细胞(CD11b+CD45hiF4/80+CD163-CD206+)
脉络从巨噬细胞(CD11b+CD45hiCD163-MHCIIhi)
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6. 小鼠脾脏组织
巨噬细胞也一般用CD11blow、F4/80+作为检测标志物,也可用CD11blow、CD64+作为检测标志物,还特征性表达MerTK,CD68。脾脏里的巨噬细胞细分的话,还可以分为红髓和白髓巨噬细胞、边缘区巨噬细胞 (MZM) 和边缘区嗜金属巨噬细胞 (MMM),具有高度异质性。用酶消化法,而不是传统的机械研磨,可以显着改善这些巨噬细胞亚群的分离,特别是 MZM (CD11bhighF4/80med Tim4high
)和 MMM(CD11bhighF4/80medTim4med)
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7. 小鼠肠道组织
肠道组织里,很多老师都会研究DC细胞,但是DC细胞的标志物CD11C,MHCII在肠道巨噬细胞中也会有表达,老师们在检测和数据分析圈门时要注意哦。
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8. 小鼠皮肤组织
除了CD11B,F4/80marker外,可添加EPCAM,CD64,CD24等标志物,用于对巨噬细胞进行更详细的划分。
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9. 小鼠肾脏组织
肾脏中,单核细胞/巨噬细胞群定义为 CD11b+和Ly6Chigh、Ly6Cintermediate(int)或Ly6Clow。所有三个群体都以低水平存在于正常肾脏中。在炎症模型中,会随着炎症程度的改变,逐渐改变。
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10. 小鼠睾丸组织
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11. 脂肪组织
小鼠脂肪组织巨噬细胞同样可以用CD11b+、F4/80+作为标志物,但是F4/80mid群包含嗜酸性粒细胞 (Siglec-F+) 和中性粒细胞(GR1+),因此,圈门的时候要十分小心,只要圈下图中1门的位置,进一步可以通过CD11c+和CD301+/CD206+去区分M1和M2。
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下表位对上述检测样本进行的汇总,便于供大家查阅:
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上述内容涉及到的部分相关组织样本制备,可以查看如下文章:(可点击查看)
样本 | 文章 |
脾脏 | 【罗工流式宝典第1式】小鼠Treg细胞的鉴定、分离及体外抑制实验 |
肾脏,主动脉 | 【罗工流式宝典第2式】小鼠高血压模型(主动脉、肾脏组织)中Th细胞的鉴定 |
淋巴结 | 【罗工流式宝典第3式】小鼠淋巴结Th17细胞体外诱导分化及鉴定 |
骨髓 | 【罗工流式宝典第4式】小鼠骨髓来源树突细胞的获取,体外诱导及相关功能评价 |
皮肤 | 【罗工流式宝典第5式】从人和小鼠的皮肤组织制备单细胞悬液 |
更多组织:
https://www.univ-bio.com/worthington.html
下表为我司验证过的,小鼠的巨噬细胞检测常备现货的骨架panel,有需要的小伙伴们欢迎询价,打包选购更优惠哦!
指标 | 荧光素 | 货号 | 规格 | |
Mouse macrophage | CD45 | FITC | 553079 | lOOug |
Mouse macrophage | CDllb | Pcrcp-cy5.5 | 550993 | lOOug |
Mouse macrophage | F4/80 | BV421 | 565411 | 50ug |
Mouse macrophage | CD86 | PE-CY7 | 560582 | 50ug |
Mouse macrophage | CD206 | AF647 | 565250 | 25ug |
Fc block | Fc block | 553141 | lOOug |
参考文献:
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