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【罗工流式宝典第15式】mouse常见研究样本类型中巨噬细胞标志物的选择

巨噬细胞是造血系统中最具可塑性的细胞,存在于所有组织中,并显示出巨大的功能多样性。它们在发育、体内平衡、组织修复和免疫中发挥作用。目前,巨噬细胞已经成为许多人类疾病的重要治疗靶点,所以认识到巨噬细胞的多样性是至关重要的。

组织驻留巨噬细胞是在大多数器官中发现的一个多样化的细胞家族,如大脑小胶质细胞、肝脏Kupffer细胞和肺泡巨噬细胞。对于各脏器中的巨噬细胞的研究,人的样本很难获取,因此小鼠模型就是最佳的研究对象。在小鼠各脏器中巨噬细胞的异质性,导致在做免疫相关的流式研究时,选择的标志物或染色结果图会出现差异。

下面给大家介绍一些小鼠不同研究样本中的巨噬细胞标志物及图例。

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1. 小鼠血液

在小鼠血液中,巨噬细胞也可以叫做Ly-6Clow单核细胞,含量较少,一般用CD11b+、F4/80+作为检测标志物。

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2. 小鼠骨髓

巨噬细胞也一般用CD11b+、F4/80+作为检测标志物。

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3. 小鼠肝脏组织

小鼠肝脏中有两类巨噬细胞,一类叫做kupffer细胞,用F4/80 hi CD11b low进行鉴定。另一类叫单核细胞衍生的巨噬细胞,用F4/80 low CD11b hi进行鉴定。

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4. 小鼠肺组织

小鼠肺中也有两类巨噬细胞,分为肺泡巨噬细胞(Alveolar macrophages)和肺间质巨噬细胞(Interstitial macrophages),可以用CD64+MerTK+圈出肺巨噬细胞,再通过CD11b和CD11c区分肺泡和肺间质巨噬细胞,且有利于在一个panel中同时做巨噬和DC的区分(不做详细划分巨噬细胞类型,也可用CD11b和F4/80marker检测)。后面还可以增加,CD11C,CD206和MHCⅡ做进一步分型。

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图例1

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5. 小鼠中枢神经系统

小鼠中枢神经系统存在多种巨噬细胞,有小(神经)胶质细胞(CD11b+CD45lowF4/80+)和单核细胞衍生的巨噬细胞(CD11b+CD45hi)。

单核细胞衍生的巨噬细胞继续细分的话,包括:

血管周围巨噬细胞(CD11b+CD45hiF4/80+CD163+CD206+)

脑膜巨噬细胞(CD11b+CD45hiF4/80+CD163-CD206+)

脉络从巨噬细胞(CD11b+CD45hiCD163-MHCIIhi)

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6. 小鼠脾脏组织

巨噬细胞也一般用CD11blow、F4/80+作为检测标志物,也可用CD11blow、CD64+作为检测标志物,还特征性表达MerTK,CD68。脾脏里的巨噬细胞细分的话,还可以分为红髓和白髓巨噬细胞、边缘区巨噬细胞 (MZM) 和边缘区嗜金属巨噬细胞 (MMM),具有高度异质性。用酶消化法,而不是传统的机械研磨,可以显着改善这些巨噬细胞亚群的分离,特别是 MZM (CD11bhighF4/80med Tim4high

)和 MMM(CD11bhighF4/80medTim4med)

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7. 小鼠肠道组织

肠道组织里,很多老师都会研究DC细胞,但是DC细胞的标志物CD11C,MHCII在肠道巨噬细胞中也会有表达,老师们在检测和数据分析圈门时要注意哦。

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8. 小鼠皮肤组织

除了CD11B,F4/80marker外,可添加EPCAM,CD64,CD24等标志物,用于对巨噬细胞进行更详细的划分。

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9. 小鼠肾脏组织

肾脏中,单核细胞/巨噬细胞群定义为 CD11b+和Ly6Chigh、Ly6Cintermediate(int)或Ly6Clow。所有三个群体都以低水平存在于正常肾脏中。在炎症模型中,会随着炎症程度的改变,逐渐改变。

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10. 小鼠睾丸组织

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11. 脂肪组织

小鼠脂肪组织巨噬细胞同样可以用CD11b+、F4/80+作为标志物,但是F4/80mid群包含嗜酸性粒细胞 (Siglec-F+) 和中性粒细胞(GR1+),因此,圈门的时候要十分小心,只要圈下图中1门的位置,进一步可以通过CD11c+和CD301+/CD206+去区分M1和M2。

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下表位对上述检测样本进行的汇总,便于供大家查阅:

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上述内容涉及到的部分相关组织样本制备,可以查看如下文章:(可点击查看)

更多组织:

https://www.univ-bio.com/worthington.html

下表为我司验证过的,小鼠的巨噬细胞检测常备现货的骨架panel,有需要的小伙伴们欢迎询价,打包选购更优惠哦!

指标 荧光素 货号 规格
Mouse macrophage CD45 FITC 553079 lOOug
Mouse macrophage CDllb Pcrcp-cy5.5 550993 lOOug
Mouse macrophage F4/80 BV421 565411 50ug
Mouse macrophage CD86 PE-CY7 560582 50ug
Mouse macrophage CD206 AF647 565250 25ug
Fc block Fc block 553141 lOOug

参考文献:

[1] Wynn TA, Chawla A, Pollard JW. Macrophage biology in development, homeostasis and disease. Nature. 2013 Apr 25;496(7446):445-55. doi: 10.1038/nature12034.
[2] Ying W , Cheruku P S , Bazer F W , et al. Investigation of Macrophage Polarization Using Bone Marrow Derived Macrophages[J]. Journal of Visualized Experiments Jove, 2013(76).
[3] Davies LC, Jenkins SJ, Allen JE, Taylor PR. Tissue-resident macrophages. Nat Immunol. 2013 Oct;14(10):986-95. doi: 10.1038/ni.2705.
[4] Gordon S. Alternative activation of macrophages. Nat Rev Immunol. 2003 Jan;3(1):23-35. doi: 10.1038/nri978.
[5] Waddell A, Ahrens R, Steinbrecher K, et al. Colonic eosinophilic inflammation in experimental colitis is mediated by Ly6C(hi) CCR2(+) inflammatory monocyte/macrophage-derived CCL11. J Immunol. 2011;186(10):5993-6003. doi:10.4049/jimmunol.1003844
[6] Gibbings SL, Jakubzick CV. Isolation and Characterization of Mononuclear Phagocytes in the Mouse Lung and Lymph Nodes. Methods Mol Biol. 2018;1809:33-44. doi: 10.1007/978-1-4939-8570-8_3.
[7] Pedragosa J, Salas-Perdomo A, Gallizioli M, et al. CNS-border associated macrophages respond to acute ischemic stroke attracting granulocytes and promoting vascular leakage. Acta Neuropathol Commun. 2018 Aug 9;6(1):76. doi: 10.1186/s40478-018-0581-6.
[8] Cho KW, Morris DL, Lumeng CN. Flow cytometry analyses of adipose tissue macrophages. Methods Enzymol. 2014;537:297-314. doi: 10.1016/B978-0-12-411619-1.00016-1.
[9] Kakoschky B, Pleli T, Schmithals C, et al. Selective targeting of tumor associated macrophages in different tumor models. PLoS One. 2018 Feb 15;13(2):e0193015. doi: 10.1371/journal.pone.0193015.
[10] Clements Meghan,Gershenovich Michael,Chaber Christopher et al. Differential Ly6C Expression after Renal Ischemia-Reperfusion Identifies Unique Macrophage Populations.[J] .J Am Soc Nephrol, 2016, 27: 159-70.
[11] Cossarizza Andrea,Chang Hyun-Dong,Radbruch Andreas et al. Guidelines for the use of flow cytometry and cell sorting in immunological studies (second edition).[J] .Eur J Immunol, 2019, 49: 1457-1973.
[12] Lokka Emmi,Lintukorpi Laura,Cisneros-Montalvo Sheyla et al. Generation, localization and functions of macrophages during the development of testis.[J] .Nat Commun, 2020, 11: 4375.
[13] Fujiyama S, Nakahashi-Oda C, Abe F, et al. Identification and isolation of splenic tissue-resident macrophage sub-populations by flow cytometry[J]. International immunology, 2019, 31(1): 51-56.

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