1、Flowjo修复上机bug之荧光标签怎么做?(点击返回目录)
众所周知,flowjo是一个功能非常强大的数据分析软件,它支持单细胞流式细胞分析,通过免疫表型、细胞周期、增殖、动力学研究、定量细胞群比较、平板筛选分析等可访问的功能,提高用户的数据洞察力。
Flowjo软件可以兼容所有流式细胞仪生成的fcs格式的数据,但是我们在使用流式细胞仪获取楼上数据的时候,往往会出现一些bug,不利于我们后续继续优化数据,今天就给大家提一点flowjo使用小技巧:
常见的bug之一就是上机的时候没有对荧光通道做标记,我们在分析数据的时就不够高效快捷,还要去翻看以往配色表格等。例如下图:
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上图里面展示的就只有荧光通道,并没有我们想要的荧光素和marker。这个大部分原因是因为上机获取数据的时候没有在仪器上面进行标注,但是别担心,flowjo会帮我们进行标注,让数据分析方便快捷。
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做好以上操作,我们在后续的分析过程中就会方便快捷很多。除此之外,更多关于flowjo分析数据小技巧会持续更新哟。
2、Flowjo里可以得到哪些统计学信息?(点击返回目录)
刚开始接触流式数据分析的小伙伴们可能会好奇,上机时得到的这么多统计学信息,究竟我们能从中得到什么?不同的统计学信息代表的是什么?
统计学信息是动态的,统计信息通常用样本的线性数据计算,无论图选择什么坐标比例进行显示。如果样本的荧光补偿矩阵非空,统计信息则用补偿后的数据进行计算。当样本数据和门圈出的群发生变化,荧光补偿矩阵被修改,图参数被改变时,图的统计信息会相应更新。
今天我们就来介绍一下常用的统计学信息:
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(PS:图中界面的调出请参看《罗工秘籍52期》)
A. Count:圈门或者群体中的events数目;B. Freq. of Parent:圈门内细胞群的events数目占上一级圈门的百分数;C. Freq. of Grandparent:圈门内细胞群的events数目占上级圈门的上级圈门中events中的百分数;D. Freq.of Total:此圈门内细胞群events数目占收集的总细胞的比例;E. Freq.of _ : 自定义比例计算,此圈门events数内占某一层级群体数目的比例;F. SD:标准差,定义
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其中 n 是群的events个数,Xi是群中的第 i 个events的对应参数值,X拔是群的均值;G. rSD (Roubust SD):rSD与一般的标准差不同,它不易被离群点影响。定义为 rSD = 0.75 ×(Q3-Q1),其中Q1和Q3分别为群的第25百分位数和第75百分位数,计算染色SI指数时会用到;H. CV:群的变异系数,用百分比表示,定义为 CV = (SD / X拔) × 100%,其中SD 是群的标准差,X拔是群的均值;I. rCV(Roubust CV):rCV等于rSD除以群的中值,定义为 rCV = rSD / Median。
我们常要检测用到的MFI值是平均荧光强度,那这里哪个参数是呢?
Median,Mean,Geometric Mean和Mode,谁才是平均荧光强度呢?
其实它们都是
只是涉及不同的统计学选择方法 Median:圈门内细胞群荧光强度的的中值,中位数;Mean:圈门内细胞群荧光强度的平均数;Geometric Mean:圈门内细胞群荧光强度的几何平均数;Mode:圈门内细胞群荧光强度的众数
具体什么时候,选择哪一种统计学方法,Flower们,可以回看下