类器官药敏ATP活性检测法

类器官在药敏药筛这块的活力检测方法采用ATP生物发光技术的方法相对其它方法更简便，更准确。小爱带您了解一下检测方法吧。

一、ATP生物发光技术原理

在类器官细胞培养物中加入相应试剂使类器官裂解，释放ATP，荧光素酶催化底物荧光素的转化，高效利用ATP的能量，发射光子形成光信号。发光强度与ATP在一定范围内成正比，而ATP又与活细胞数目又呈正比，因此可以对类器官活细胞数目进行定量检测。

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二、类器官ATP生物发光方法

类器官的准备
使用适合进行发光检测的24孔板，每孔接种类器官与基质胶混合物25ul平铺到孔底部，同时设置不含类器官的基质胶与培养液孔作为阴性对照，按照类器官培养的常规方法培养类器官。如有需要，可加入药物处理类器官。此外，如有必要也可以设置类器官的浓度梯度，以便后续确定试剂盒的使用效果。

试剂准备
a. 融化：将ATP活性检测试剂盒置于2~8℃或室温条件下融化；
b. 使用前轻柔颠倒几次使溶液混合均匀。

检测步骤
a. 于培养箱中取出待测类器官培养板，室温放置30min，以使培养板温度平衡至室温；

b. 加入与待测类器官培养物等体积并平衡至室温的缓冲液(abs9730)。例如，使用24孔培养板时，先去除类器官培养基，用类器官缓冲液置换静置清洗3次，然后吸取25μl本品加入25μl待测类器官培养物中（加入体积与基质胶团混合物体积一致）；

c. 剧烈振荡5min使类器官充分裂解；室温放置25min以稳定发光信号，即可进行检测；

d. 使用具有检测化学发光功能的多功能酶标仪进行化学发光检测。请根据仪器要求设置相应的参数，每个孔的检测时间一般为0.25-1s或更长时间，具体需根据仪器的检测灵敏度进行适当的调整；

e. 根据化学发光读数直接计算类器官的相对活力，或根据ATP标准曲线计算出ATP的量从而计算出类器官细胞的相对活力。类器官在0-30个类器官/孔的类器官密度范围内有良好的线性关系，ATP标准品0-10,000nM浓度范围有良好的线性关系；