p16/Ki-67双染：子宫颈癌前病变诊断的精准之道

/背景/

P16是一种抑癌基因，与细胞周期调控相关，通过抑制CDK4和CDK6的活性来阻止细胞进入S期，在调节细胞分裂G1-S期过程中起关键作用。

在宫颈上皮内瘤变（CIN）病变时，P16表达水平异常升高，表现为P16蛋白的异常核及胞浆阳性。可用于宫颈癌高级别鳞状上皮病变与化生、萎缩等的鉴别。

Ki-67是一种细胞增殖标志物，Ki-67在细胞周期的G1、S、G2和M期均有表达，但在细胞处于静止期（G0期）或凋亡时不表达。

Ki-67的检测在乳腺癌、肺癌、结肠癌等癌症中的诊断和分级中都有应用。Ki-67值的高低直接反映了肿瘤细胞增殖的活跃程度，也是判断肿瘤恶性程度和预后一个重要的标志物。

子宫颈癌

子宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤之一, 发病率在我国女性恶性肿瘤中位居第二。

高危型人乳头瘤病毒（HPV）持续感染是引起子宫颈癌和子宫颈上皮内病变的主要病因，尤其是HPV的某些高危型别，如HPV 16和HPV 18。子宫颈高级别上皮内病变包括高级别鳞状上皮内病变（HSIL）及原位腺癌（AIS）。HSIL包括子宫颈鳞状上皮内瘤变（CIN）2 级和3级，主要由HPV感染后引起，细胞有明显的异型性，核分裂象增多。

宫颈癌发展缓慢，能需要数年时间才能从前期病变发展为侵袭性癌症。宫颈癌前病变和宫颈癌早期可能没有任何症状，且子宫颈癌治疗效果和预后欠佳，因此定期进行宫颈癌筛查对早期发现和治疗宫颈癌至关重要。

目前传统的子宫颈癌筛查多是使用细胞学/HPV初筛，但其特异性和灵敏度都不高。2023年，《老年女性子宫颈病变筛查及异常管理中国专家共识》将p16/Ki-67细胞学双染纳入筛查方案。

p16/Ki-67双染

p16/Ki-67双染检测是一种用于宫颈癌前病变诊断的免疫细胞化学检测方法，样本类型为宫颈脱落细胞。检测原理是正常细胞不会同时出现p16和Ki-67过度表达，双染阳性则提示提示高危型HPV持续性感染，与高级别鳞状上皮内病变（HSIL）相关。

图1 老年女性以HR-HPV为基础的子宫颈病变查及异常管理流程。HR-HPV：高危型人乳头瘤病；TCT：薄层液基细胞学检查；ASC-US:不典型鳞状上皮细胞。
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已有大量研究使用临床样本进行筛查方法比较：

Mariam El-Zein研究收集492个宫颈样本进行双染检测，结果发现：①双染细胞学检测的阳性率随着组织学严重程度的增加而增加，从正常组织的30.6%到癌症组织的87.5%。②双染细胞学单独使用时，对于CIN2+和CIN3+的敏感性低于HPV检测，但在CIN2+和CIN3+的特异性上分别提高了7.9%和9.6%。

在中国也有相关临床样本研究：选取537名年龄在20至79岁之间的女性的宫颈脱落细胞，p16/Ki-67的特异性在检测CIN2+和CIN3+中都高于HR-HPV检测（CIN2+为85.96%对比67.54%，CIN3+为79.84%对比62.90%），双染可作为管理ASC-US女性的有效分流方法。

p16/Ki-67双染诊断优势

在临床上，p16/Ki-67双染检测在宫颈癌筛查中具有极高灵敏度，其特异性和灵敏性都优于HPV检测和细胞学检测。有助于提高宫颈癌前病变的检出率，也减少阴道镜的过度干预。

p16/Ki-67双染检测不受HPV不同亚型的影响，可独立评价病变严重程度，p16/Ki-67双染的阳性率，随着宫颈病变的严重程度升高而升高，可减少延误诊断。

p16/Ki-67双染可以避免单染带来的定位差异，通过阳性细胞在鳞状上皮的定位，结合TCT与HPV检测可用于监测HSIL(CINII/II)的复发，可对宫颈CIN的病理诊断、分级和分层管理。

双染检测不受细胞形态学影响，细胞质染色为特异性棕色(p16)、细胞核染色为特异性红色(Ki-67)，仅通过颜色变化即可进行判别，用于辅助诊断宫颈癌前病变。通过更客观简便的判读方式，而非通过形态学，操作简便性和准确性都大幅度提升。

图2 子宫颈上皮细胞p16/Ki-67双染阳性
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随着中国人口老龄化和经济社会发展欠均衡，部分地区的子宫颈病变筛查率低，我们子宫颈癌患者发病人数也逐渐升高，提高筛查人数和优化筛查方式刻不容缓。p16/Ki-67双染检测技术为宫颈癌的早期诊断提供了一种更为简便、安全且高效的筛查方法，为宫颈癌的早期发现和治疗提供了强有力的支持。

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