针对血样样本，我们展开了系列文章分享，第一篇文章是针对血液的收集和保存（点击查看）。今天就来讲一讲血液的处理------裂红、溶血素的使用攻略！
血样来源
Whole blood全血样本
Buffy coat（血液样本中除去红细胞和血浆后含有白细胞的部分）
LRSC（Leukocyte reduction system chambers）
cord blood脐带血
bone marrow 骨髓样本
Leukopak®白细胞单采术
1红细胞、PBMC、淋巴细胞的占比、绝对计数
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2不同血样中的不同淋巴细胞占比
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二常见的两种血样处理方式：裂红 & PBMC
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1裂红workflow
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进入流式专家公众号---流式装备包---外周血样本制备，可以查看详细操作视频
2血量&孵育时间推荐
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3裂红结果判断
a.裂红后，样本清澈
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b.流式上机分群清晰
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三裂红处理常见问题
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外周血中常见的免疫细胞检测指标
其中T细胞的分群使用了较多的趋化因子受体指标
Naive：CD197+CD45RA+
TE:CD197-CD45RA+
TcM: CD197+CD45RA-
TeM: CD197-CD45RA-
TH1: CD183+CD196-
TH2: CD183-CD196-
TH17:CD183-CD196+
CD197=CCR7,CD183=CXCR3, CD196=CCR6 为趋化因子受体
1通过流式检测趋化因子受体表达的灵敏度
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全血样本直接染色或处理得到PBMCs用于染色。文章比较了9种不同的处理方案，以确认哪种方案可以最大限度地检测趋化因子受体。
(...) Indicates protocol that gave greatest sensitivity;
(++) loss of 1-24% sensitivity;
(+) loss of 25-39% sensitivity;
(-) loss of more than 40%.
各位小伙伴，你选对样本处理方案了吗？
最佳的处理方式推荐使用Ficoll（#abs930-200ml）哦~
2先裂红还是先染色？
a.红细胞裂解-洗涤-流式染色-洗涤(LWSW)法
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减少碎片量，获得更好的信噪比
洗两次细胞损失多一点
b.流式染色-红细胞裂解-洗涤(SLW)法
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少离心一次，减少一定的细胞损失
与细胞粘附相关的指标不适用
c.两个不同的处理染色结果是否有差异？--细胞碎片
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比较了SLW和LWSW评估的104种抗体的表达，以确定两种方法之间的差异。
比较了两种方法制备的阳性细胞百分比和MFI，尽管SLW的染色指数和信噪比显著高于LWSW样品，但阳性细胞百分比和MFI均无显著差异。
d.两个不同的处理染色结果是否有差异？---MFI信号差异
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e.104种细胞表面抗原表达，以确定两种方法之间的差异
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Reference:
1. The total mass, number, and distribution of immune cells in the human body
2. Comprehensive peripheral blood immunoprofiling reveals five immunotypes with immunotherapy response characteristics in patients with cancer
3. Development of a Modular Assay for Detailed Immunophenotyping of Peripheral Human Whole Blood Samples by Multicolor Flow Cytometry
4. Making human immune systems more interpretable through systems immunology
5. Multi-modal profiling of peripheral blood cells across the human lifespan reveals distinct immune cell signatures of aging and longevity
6. Optimized lymphocyte isolation methods for analysis of chemokine receptor expression
