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胃干细胞是存在于胃组织中的成体干细胞，具有自我更新和高度增殖能力，它有多向分化潜能，能分化形成各种胃黏膜上皮细胞。
随着对干细胞研究的不断深入，胃干细胞的应用为胃生理与疾病的研究提供了新的手段。
自2010年报道胃类器官模型的构建方法以来，胃类器官迅速成为胃相关疾病研究领域的热点。
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实验步骤
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组织的分离
1. 准备好实验所需的手术器械（酒精浸泡消毒）、耗材及试剂。将基质胶置于冰上，24孔板在37℃ CO2培养箱中预热30min以上。将离心机预冷为4℃。实验于无菌超净台中进行操作。
2. 先用异氟烷麻醉小鼠，后采取颈椎脱臼方法处死小鼠。
3. 将小鼠浸泡在75%酒精中消毒5min。
4. 打开小鼠腹腔，剪断食管-胃连接部和幽门之间的胃部组织，沿着大弯侧剖开。放置于冰冷无钙镁PBS中，用1ml移液管反复冲洗，洗去胃内容物。剔除胃周边的系膜。
5. 将胃组织用剪刀剪为2-3mm的碎片，并将胃碎片组织置入含有15ml的无钙镁PBS溶液的50ml锥形管中，用移液管反复吸入并吹打20次，待胃组织碎片沉底后，更换无钙镁PBS溶液再用移液管反复吸入及吹打20次。
6. 重复步骤5，反复10-15次，直至液体澄清。
7. 将胃组织碎片先后加入50ml 2mmol/L EDTA、5mmol/L EDTA，于滚轴摇床上分别消化30min。
8. 倒掉5mmol/L EDTA溶液，加入含0.1%BSA的无钙镁PBS 20ml中和反应，移液管反复吹吸10次，待组织碎片沉底后，吸取上清过70μm滤网，将其标记为第1管。再向胃组织碎片中加入含0.1% BSA的无钙镁PBS 20ml，吹打10-15次，待组织碎片沉底后，吸取上清过70μm滤网，将其标记为第2管，同上步骤，分别标记为第3、4、5管。
9. 将第1、2、3、4、5管内液体分别吸取1ml放入24孔板中，倒置显微镜观察所分离上皮和腺管情况，选取1管-2管腺体较多者，置入4℃离心机，290G转速离心5min。
10. 倒去上清，将沉淀重悬于DMEM-F12溶液中，再次置入4℃离心机，290G转速离心5min。
11. 弃上清，根据沉淀量多少，加入1:1比例混合的培养液：基质胶，注意要冰上操作，防止基质胶凝固，用1ml移液枪轻轻混匀。
12. 将50μl悬有胃腺的基质胶加入预热的24孔板中，动作要轻柔，避免枪尖触碰到24孔板的底部。
13. 将种好基质胶的24孔板置于37℃的CO2培养箱孵育10min，使得基质胶完全聚合。
14. 再将每个孔板中加入750μl的完全培养基，置于37°C的5% CO2培养箱中培养。
15. 每隔2天，进行半量换液，一般5-6天，根据胃类器官生长情况，进行传代。 -
胃器官的培养、传代
16. 根据所观察的胃类器官生长状况，选择传代时机，如果胃类器官较大、较密，中间发黑，可以进行传代，选择的传代比例可为1:2-4。
17. 准备好传代所需的物品，将基质胶提前放入4°C冰箱融化。按照24孔板中每孔25μl的用量计算所需的基质胶用量。将培养液及生长因子从-80°C冰箱取出提前融化，放置于常温15°C-25°C。按照24孔板每个孔加入750μl培养液，计算培养液用量。预先在37°C孵箱加热24孔板2h。
18. 将含胃类器官的24孔板放置于冰板上操作，吸掉半量培养液，用1ml枪尖将基质胶从孔板上刮下来。
19. 用29G胰岛素注射器，将含有胃类器官的培养液吸入，使得所有的培养液都通过针头进入注射器，再注入置于冰里的50ml含有DMEM-F12的Corning管里，通过机械力量将胃类器官进行切割、分散。
20. 290G，4°C离心分散的胃类器官5min，倒去DMEM-F12，根据沉淀量多少，加入1:1比例混合DMEM-F12:基质胶(冰上操作)，用1ml移液枪吹打混匀，接种于24孔板内。
21. 再将每个孔板中加入750μl的完全培养基，置于37°C的5% CO2培养箱中培养。
22. 每隔2-3天，进行半量换液，根据胃类器官生长情况，可考虑安排进一步实验或传代、冻存。 -
类器官的冻存
23. 选择传代后第3或4天，生长状态比较好的胃类器官进行冻存。
24. 将24孔板置于冰板上操作，吸去培养液，每孔加入0.5ml无血清冻存液，用枪尖将含有胃类器官的基质胶刮下来。
25. 将含胃类器官的冻存液转入2.5ml冻存管，后置于液氮中冻存。 -
参考文献
P.S.以上实验步骤均来自文献总结，仅供参考
1. Takahito Katano , Akifumi Ootani, et al.Establishment of a Long-Term Three-Dimensional Primary Culture of Mouse Glandu- lar Stomach Epithelial Cells Within the Stem Cell Niche.Biochem Biophys Res Commun. 2013 Mar 22;432(4):558-63.
2. do Nascimento Santos CA, Borojevic R,et al.Characterization of Gastrospheres Using 3D Coculture System. Methods Mol Biol. 2018;1842:105-121
3. Carlos Antônio do Nascimento Santos , Radovan Borojevic , et.al Characterization of Gastrospheres Using 3D Coculture System. Methods Mol Biol. 2018;1842:105-121.
4. Karam SM (1995) New insights into the stem cells and the precursors of the gastric epithelium. Nutrition 11:607‒613
5. Santos CA, Andrade LR, Costa MH, Souza HS, Granjeiro JM, Takiya CM et al (2016) Gastrospheres of human gastric mucosa cells: an in vitro model of stromal and epithelial stem cell niche reconstruction. Histol Histopathol 31:879‒895