尺寸排阻色谱根据外泌体和杂质粒子的尺寸不同进行分离。用于尺寸排阻色谱的色谱柱中填充有多孔的凝胶颗粒，样品流经色谱柱，尺寸大于凝胶颗粒孔径的物质不能进入孔径，经过凝胶颗粒之间的缝隙洗脱出来，而尺寸小于凝胶颗粒孔径的物质则会进入凝胶颗粒内部的孔道，洗脱所需的时间延长。
在外泌体的分离纯化中，外泌体尺寸较大，先洗脱出来，游离蛋白等杂质尺寸较小，所需洗脱时间更长，从而与外泌体分离。

下方实验步骤：以SmartSEC™ Mini EV Isolation System为例

图4. 传统尺寸排阻色谱（此图重新画，以免侵权
△点击放大图片

SBI采用新型专用的SmartSEC 尺寸排阻技术。它提供了尺寸排除和亲和相互作用模式的双重功能。在单一的树脂介质中结合这两种模式，消除了经典SEC的耗时和劳动密集型的过程。在SmartSEC中，多孔珠的内部核心以亲和相互作用模式功能化，可以捕获和保留可达400 kDa（15-20 nm）的蛋白质杂质，如IgG和白蛋白。珠子的外壳是惰性的，这最大限度地减少了非特异性结合。

图5. SmartSEC bead 技术和EVs 纯化机制
△点击放大图片

图6. SmartSEC 技术纯化示意图。生物液体，如血清或血浆，应用于预洗的SmartSEC beads，提供有足够的分离缓冲液，在室温下旋转彻底混合和结合30分钟。孵育后，在500 x g下离心1 min，回收分离的EVs。洗脱过的EVs已准备好用于任何下游应用。
△点击放大图片

图7. 实验流程示意图
△点击放大图片

2.3 外泌体纯化-超滤法