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2.5 外泌体纯化-沉淀法

| 2.6 外泌体纯化-免疫捕获法

聚合物沉淀法是一种常用的外泌体分离方法。类似于乙醇介导的核酸沉淀,高度亲水的聚合物与外泌体周围的水分子相互作用,形成疏水性微环境,从而导致外泌体沉淀。例如聚乙二醇(PEG)是一种众所周知的,无毒的聚合物,具有重塑周围材料的水溶性的能力,已被普遍使用。商业化品牌也会有自己专利的聚合物,例如ExoQuickTM 是SBI公司专用的预包装的双戊酸树脂柱用于快速外泌体沉淀分离。

下方实验步骤:以ExoQuick® ULTRA EV Isolation Kit为例
 

图8. 实验流程示意图
△点击放大图片

实验步骤

  • 1
  • 2
  • 3
  • 4
  • 5
  • 6
  • 7
  • 8
  • 9
  • 1

    收集

    收集含有外泌体的液体样本,3000×g离心15分钟,以清除细胞碎片。

  • 2

    转移

    上清液转移到一个新的试管中。(可选:如果仍可检测到额外的碎片,以12000xg离心10分钟,并将上清液转移到新管中。)

  • 3

    加入

    澄清的生物流体中加入适当体积的ExoQuick,如表中所示。

    样本 上样量 ExoQuick 用量 孵育时间
    血清 250 µL  67 µL 30 min at 4°C 
    血浆 250 µL   67 µL  30 min at 4°C
  • 4

    搅拌

    通过翻转或弹动试管来搅拌均匀,并在冰上孵育30分钟。在孵育期间不需要旋转。 

  • 5

    离心

    ExoQuick/样本液体混合物3,000×g离心10分钟。离心可在室温或4°C下进行。离心后,EVs可能在管的底部以米色或白色的颗粒形式出现。 

  • 6

    提取

    小心地提取出上清液,注意不要干扰颗粒中沉淀的EVs。 

  • 7

    重悬

    将EVs颗粒用200µL的缓冲液重悬。

  • 8

    测量

    测量并记录样品中的蛋白浓度。

  • 9

    热门产品: ExoQuick® ULTRA EV Isolation System

    优势:
    更加干净-与其他方法(包括超速离心法)相比,可减少 75% 的白蛋白携带量和 40% 的免疫球蛋白携带量
    更高的产品-相较于超速离心法和其他方法可以提取更多的外泌体
    更佳的生物标志物检测-增加检测灵敏度(生物标志物CD9提升11倍,CD81提升8倍)
    快速—只需要少于20min的手动操作时间包含一个便捷基于柱提的回收流程
    性价比高—每一个反应更加节省成本

     

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