对于大多数细胞来说,体外培养时所用的标准培养基都必须在基础培养基的基础上外加FBS作为生长添加物。常用的FBS通常来自牛血清,其中含有大量的牛外泌体。这些外泌体含牛的相关蛋白质或miRNA等分子,当研究相关细胞自身分泌外泌体时,牛血清中的外泌体可能会造成严重的背景问题,从而影响或干扰结果的判断。外泌体培养应选用不含外泌体的专用胎牛血清,由无菌采集健康胎牛血清过滤而成,去除97%以上的胎牛血清内源外泌体。具有无支原体,无内毒素等特点。
细胞培养-血清使用方法
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血清解冻
将血清从冰冻区中取出后(切勿直接将血清从 -20°C进入 37°C解冻,这样因温度改变太大,容易造成蛋白质凝集而出现沉淀),先置于 2~8°C区域中使之融化,然后再室温下使之全融。使用前在预温到将使用的温度(如 37°C),但必须注意的是,解冻过程中应轻轻的摇晃均匀。
血清在解冻过程中可能会出现少量絮状或片状析出物(镜检形状类似小黑点),主要是血清中脂蛋白的变形或是纤维蛋白(形成凝血的蛋白之一)析出 ,但这些析出物,并不影响血清本身的质量。
若一次无法用完一瓶,建议无菌分装血清至恰当的灭菌容器中,再放回冷冻。
去除方法:可使用 0.45μm 过滤器将完全培养基(血清、培养基、双抗等物质配置完成)过滤即可。避免析出物和澄明度降低
建议在使用血清的时候,注意正确的血清解冻步骤,并尽量避免长时间的将血清至于非冻结状
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