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4.2.1 外泌体鉴定方法-NTA

| 4.2.2 外泌体鉴定方法-纳米流式细胞术

NTA实验步骤:以SBI品牌EXONTA110A-1为例

(1)概念
NTA即纳米颗粒跟踪分析技术,通过检测样本中粒子粒径分布从而进行外泌体鉴定的一种方法。简而言之,激光照射样品,样品中的颗粒对光进行散射,然后由连接在显微镜上的相机以每秒 30 帧的速度对光进行成像。NTA 软件可同时收集多个颗粒的数据,并利用斯托克斯-爱因斯坦方程计算出每个颗粒的流体力学直径。

△点击放大图片


(2)什么是荧光 NTA,它与传统 NTA 有什么不同?
SBI 已开发出 ExoGlow-NTA,这是一种用于荧光 NTA 的专有染料,可仅收集异质样品中存在的细胞外囊泡的数据,从而使优秀的外泌体研究工具更上一层楼。这样就能获得更准确的 EV/ 外泌体 NanoSight 数据,忽略蛋白质聚集体、膜分馏物和其他背景颗粒,从而提供特定于 EV 的颗粒大小和浓度。
在荧光 NTA 的数据采集过程中,只获取荧光标记颗粒的光散射,从而获得 EV 特异性信号,忽略膜碎片、蛋白质聚集体和其他背景颗粒,因为它们不与 ExoGlow-NTA 染料结合。因此,使用 ExoGlow-NTA 套件,NTA 分析提供的数据能更准确地报告样品中的 EV,而不是样品中的所有颗粒。

实验步骤

  • 1
  • 2
  • 3
  • 4
  • 1

    预热

    预热反应缓冲液,在37°C下放置3-5分钟,混合均匀

  • 2

    混合

    对于每个样品和标准品,将2µL标记染料加入12µL反应缓冲液中,充分混合,直到染料完全溶解,制成标记反应缓冲液。

  • 3

    标记

    从步骤2开始,到样品中加入外泌体(相当于1-100µg的蛋白质),用水或1xPBS使反应的总体积达到50µL。要标记标准品,将1µL的标准品添加到标记反应缓冲液中。

    △点击放大图片

  • 4

    孵育

    移液混合,室温孵育3-5分钟(避光)。样品和标准品都可以用于荧光NTA分析。

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